1 Етапи становлення і розвитку вірусології. Внесок вітчизняних учених. Лауреати Нобелівської премії в області вірусології



Скачать 176.94 Kb.
страница8/65
Дата11.06.2018
Размер176.94 Kb.
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   65
__
________________________________________________________________________


8. Методи ідентифікації вірусів. РГГА, РН, кольорова реакція.

Цветная проба. Среды 199 и Игла, в которых культивируют культуры клеток, имеют малиновый цвет, рН=7,2-7,4 и содержат индикатор, меняющий окраску среды при изменении рН. При культивировании в этих средах клеточных культур, не инфицированных вирусом, вследствие выделения клетками кислых продуктов метаболизма цвет среды изменяется на оранжевый. Вирусинфицированные клетки в результате подавления метаболизма вирусной репродукцией, а также в результате ЦПД вирусов, разрушаются, щелочная цитоплазма клеток попадает в среду, не изменяя её цвета (среда остаётся красной).

Реакция нейтрализации (РН) может быть проведена на культуре клеток, куриных эмбрионах и животных. В пробирках готовят нейтрализационные смеси, состоящие из равных объемов вируссодержащего материала (обычно 100 ТЦД50 вируса в 1,0 мл) и диагностической сыворотки (1,0 мл). После тщательного встряхивания приготовленные смеси выдерживают для взаимодействия в течение 3 ч при 37?С. Затем нейтрализационные смеси вносят в чувствительную клеточную культуру, которую инкубируют при 37?С 5-7 суток, после чего учитывают результаты по ЦПД и цветной пробе

Если антигены выделенных вирусов соответствуют антителам диагностической сыворотки, то вирусы инактивируются и не вызывают инфицирования клеток культуры (ЦПД отсутствует). Живые незараженные вирусом клетки, выделяя кислые метаболиты, вызывают изменение цвета среды с малинового на желтый. В этом случае РН считается положительной, а выделенный вирус идентифицируется по диагностической сыворотке. При развитии ЦПД и сохранении красного цвета в среде культивирования клеточной культуры, РН считается отрицательной, а выделенные вирусы – неидентифицированными.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) используется для идентификации вирусов, имеющих поверхностный антиген – гемагглютинин, способный вызывать агглютинацию эритроцитов. Гемагглютинин содержат вирусы гриппа, парагриппа, бешенства, аденовирусы и др. Вирусные гемагглютинины видо- и типоспецифичны. Механизм РТГА заключается в том, что диагностические антитела - антигемагглютинины препятствуют вирусам агглютинировать эритроциты чувствительных видов животных.

В пробирках в изотоническом растворе натрия хлорида готовят двукратные разведения диагностической сыворотки (1:10, 1:20 и т.д.). Затем в каждую пробирку вносят равное количество вируссодержащей жидкости, в которой находится 4 ГАЕ вируса. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч, после чего в каждую пробирку вносят равный объем 1 % суспензии эритроцитов. Смесь инкубируют повторно 30-60 минут при 22?С и учитывают результаты реакции. Если вирусные гемагглютинины гомологичны антителам сыворотки, то вирус утрачивает способность склеивать эритроциты. В РТГА это происходит до тех пор, пока количество антител будет достаточным для блокады вирусных гемагглютининов. При недостатке антител агглютинирующая способность вирусов восстанавливается. Титром сыворотки называется ее наибольшее разведение, которое тормозит гемагглютинацию.

Таким образом, РТГА считается положительной, если торможение гемагглютинации наступает, а выделенный вирус типируется по диагностической сыворотке.

Напротив, если вирусные гемагглютинины не гомологичны антителам диагностической сыворотки, то вирус не утрачивает способности склеивать эритроциты. В этом случае РТГА считается отрицательной, а выделенный вирус – не идентифицированным




__________________________________________________________________________




Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   4   5   6   7   8   9   10   11   ...   65


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница