3 история открытия пцр и разработка метода пцр 7 Механизм полимеразной цепной реакции 9



страница1/12
Дата01.10.2017
Размер1.19 Mb.
ТипУчебное пособие
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12


ГОУ ДПО «Иркутский государственный институт

усовершенствования врачей»

Министерства по здравоохранению и социальному развитию
ГУЗ Иркутский областной клинический консультативно-диагностический центр

Медведева Т.В., Скворцова Р.Г., Кузьменко В.В., Огарков О.Б.

ПЦР-анализ в клинической лаборатории
Учебное пособие

Иркутск


2009

.

В пособии представлены основные сведения об одном из современных методов диагностики – полимеразной цепной реакции (ПЦР). Дано описание всех его этапов – преаналитического, аналитического и постаналитического. Подробно освещены особенности использования ПЦР для диагностических целей, интерпретации результатов применения этой методики, обсуждаются ее преимущества и недостатки в сравнении с другими методами диагностики инфекций.



Пособие предназначено для врачей клинической лабораторной диагностики и врачей других специальностей.

Рецензенты: Доктор медицинских наук, профессор Ю.В. Котловский

Доктор биологических наук, профессор И.М.Устьянцева
Медведева Т.В., Скворцова Р.Г., Кузьменко В.В., Огарков О.Б., 2009



УДК

616-078

ББК

53.45




П91



Оглавление


Оглавление 3

Введение 6

История открытия ПЦР и разработка метода ПЦР 7

Механизм полимеразной цепной реакции 9

Основные компоненты ПЦР 9



Праймеры. 9

Полимераза. 9

Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты. 9

Ионы двухвалентных металлов. 9

Буферы. 10

Анализируемый образец. 10

Циклический температурный режим 10

Стадии постановки ПЦР 11



Пробоподготовка (выделение ДНК/РНК) 12

Амплификация 14

Факторы, влияющие на эффективность амплификации 15

Использование «горячего старта» при постановке ПЦР 16

Приборное обеспечение 16



Регистрация результатов 17

Возможности лабораторной диагностики инфекционных болезней 20

Микробиологический метод 21

Иммунологический метод 22

Микроскопия 22

Генотипический метод (ПЦР) 23

Преимущества ПЦР перед другими методами клинической лабораторной диагностики 24

Универсальность процедуры выявления различных возбудителей 24

Специфичность 25

Чувствительность 25

Актуальность ответа (быстрота получения результата анализа) 26

Возможность экспертизы. 27



Исследуемый биологический материал 27

Локализация возбудителей 27

Правила забора материала и транспортировки клинического материала для ПЦР-диагностики 28

Кровь, плазма, сыворотка 29

Соскоб с эпителиальных клеток для выявления ДНК возбудителей инфекций, передающихся половым путем 30

Факторы, влияющие на эффективность выявления урогенитальных патогенных микроорганизмов с помощью НК. 30

Правила подготовки больного для ПЦР-диагностики урогенитальных инфекций 31

Мазок с конъюнктивы, слизистой зева и дыхательных путей 32

Моча 32

Мокрота 33



Синовиальная жидкость 33

Другие биологические жидкости 33

Секционный материал 33

Применение метода ПЦР в медицине 33

Диагностическое значение ПЦР-исследований в клинике инфекционных заболеваний 34

Гепатит А (HАV), Е (HЕV) 36

Гепатит В (HВV) 36

Гепатит D (ВГD) 37

Гепатит С (HCV) 38

Использование ПЦР в пульмонологии и фтизиатрии 40

Применение ПЦР в урогинекологической практике. 42

Основные клинические синдромы и урогенитальные инфекции 43

Криминология 47

Установление отцовства 48

Персонализированная медицина 49

Клонирование генов 50

Онкология 51

Применение ПЦР в практике службы крови 51

Управление качеством ПЦР-исследований 52

Документы, регламентирующие использование методов генодиагностики инфекций 52

Основные принципы организации ПЦР-лабораторий 53

Порядок проведению работ в лаборатории 55

Обеспечение качества в ходе ПЦР-исследований 56

Преаналитический этап 57

Аналитический этап 59

Контроль качества ПЦР-исследований 61

Контроль реакции амплификации 62

Внутренний контроль ВКО 64

Проблема контаминации 64

Действия при возникновении контаминации нуклеиновыми кислотами 66

Постаналитический этап 67

Заключение 71

Вопросы для самопроверки 72

Ответы на вопросы для самопроверки 76



Список цитированной литературы 77

Приложение 77

Возможности ПЦР-диагностики в ГУЗ ИОККДЦ 77



Комплекс исследований на заболевания, передающиеся половым путем (ЗППП), 2Ж3001 77

Хламидиоз, 2Ж3002 78



Туберкулез, 2ЖЗ003 79

Гепатит С, 2Ж3004 80

Микоплазма гоминис, 2Ж3005 81

Трихомониаз, 2Ж3006 81

Гепатит В, 2Ж3007 82

Уреаплазма, 2Ж3009 83

Папиллома (ВПЧ с определением онкогенности), 2Ж3010 83

Гонорея, 2Ж3011 84

Гепатит С количественный, 2Ж3012 86

Генотипирование вируса гепатита С, 2Ж3013 86

Микоплазма гениталиум, 2Ж3015 87

ЦМВ, 2Ж3019 88

Вирус Эпштейна-Барр, 2Ж3020 89

Вирус герпеса 1-го и 2-го типов, 2Ж3021 90

Вирус герпеса 6-го типа, 2Ж3022 90

Токсоплазмы гондии, 2Ж3023 91

Энтеровирус, 2Ж3027 92

Гепатит В количественный, 2Ж3031 93





Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница