3 история открытия пцр и разработка метода пцр 7 Механизм полимеразной цепной реакции 9


Управление качеством ПЦР-исследований



страница6/12
Дата01.10.2017
Размер1.19 Mb.
ТипУчебное пособие
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12

Управление качеством ПЦР-исследований


Применительно к медицинским лабораториям понятие «качество» можно сформулировать следующим образом: качество лабораторных исследований – это правильно и своевременно назначенные тесты для нуждающегося в них пациента, выполненные на достаточном аналитическом уровне с необходимой информацией для их интерпретации.

ПЦР – высокотехнологический метод, требующий соблюдения строгих правил оснащения и организации работ в ПЦР-лабораториях, которые обобщены и сформулированы в нормативных документах. На основании этих документов проводится лицензирование деятельности лабораторий, занимающихся генодиагностикой.


Документы, регламентирующие использование методов генодиагностики инфекций


Основные документы, регламентирующие проведение ПЦР-анализа в КДЛ следующие:

1.

«Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР». № 2455-81.

2.

«Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Постановление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 28 января 2008 г. об утверждении санитарно-эпидемиологических правил. № 1.3.2322-08.

3.

«Требования к планировке помещений и режиму работы в ПЦР-генодиагностической лаборатории» // Методические рекомендации, разработанные ЦНИИЭ, РНИПЧИ, ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

4.

«Методические указания МУ 1.3.1888-04 по организации работы при исследованиях методом ПЦР-материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности»;

5.

«Методические рекомендации по забору, транспортировке, хранению клинического материала для ПЦР-лаборатории, МЗ РФ ЦНИИЭ, 2005 г.»;

6.

«Методические указания по применению дезинфицирующего средства «ДП-2Т» МЗ РФ 2001 г.».

7.

Работа с возбудителями туберкулеза и материалом, подозрительным на инфицированность возбудителем туберкулеза, осуществляется в соответствии с «Приказом МЗ РФ от 21.03.2003 №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации».

Основные принципы организации ПЦР-лабораторий


На этапе создания лаборатории для обеспечения качества ПЦР-исследований необходимы продуманные инженерно-планировочные решения, согласно «Методическим рекомендациям по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения», методическим указаниям Следует четко разграничивать ПЦР-лабораторию на "зоны" (комнаты) для каждой из стадий ПЦР-реакции.

Руководствуясь этими документами, лаборатория молекулярной биологии ИДЦ разделена на следующие зоны (комнаты):



  1. Пре-ПЦР-помещение 1 (площадь 3,6 кв. М), которая предназначена для первичной обработки клинических образцов. Обработка клинических образцов производится в настольном боксе с ультрафиолетовыми лампами с вытяжной вентиляцией. После первичной обработки клинический материал инактивируется с лизирующим буфером, обеспечивающим полное обеззараживание материала, полное разрушение клеточных мембран и лизис клеток, не повреждая ДНК и не ингибируя ПЦР. Обеззараженные пробы переносятся в закрытых пластмассовых емкостях в пре-ПЦР-помещение 2. Остатки клинического материала, использованная посуда и другие загрязненные ДНК/РНК материалы на этапах первичной обработки собираются в закрывающиеся емкости, предназначенные для транспортировки, и переносятся в автоклавную. В автоклавной для создания асептических условий приточно-вытяжная система оснащена фильтрами тонкой фиксации.

  2. Пре-ПЦР-помещение 2 (площадь 34,5 кв. М) – с помощью лабораторной информационной системы (ЛИС) производится компьютерная сортировка поступивших проб на ПЦР-исследования, составление протоколов, выдача результатов лабораторных исследований. В кабинете имеется рабочая зона для выделения нуклеиновых кислот и боксированная зона для приготовления ПЦР-смеси, постановки ПЦР (внесение в подготовленные с ПЦР-смесью пробирки выделенных препаратов ДНК, РНК или кДНК). Настольные боксы оснащены ультрафиолетовыми лампами. По окончании работы все объекты-пробы убираются в холодильники. Клинические образцы и пробы, содержащие ДНК/РНК, хранятся отдельно от реагентов. На окнах предусмотрены жалюзи для защиты рабочих столов от попадания солнечного света. В кабинете установлен кондиционер в соответствии с санитарными правилами.

  3. Чистая комната (площадь 2,3 кв.м.) – для приготовления реакционных смесей.

  4. Пост-ПЦР-помещение. Здесь проводится электрофоретический анализ продуктов амплификации и документирование результатов с помощью видиосистемы. Комната находится в отдаленном от основных зон помещении, чтобы исключить контаминацию через движение воздуха из пост-ПЦР в пре-ПЦР-помещения. Работа ведется в одном направлении от пре-ПЦР-помещения к пост-ПЦР-помещению. Работа производится в одноразовой рабочей одежде. После проведения и обработки фотоизображений электрофорезов ПЦР исследований и их архивации пробирки с продуктами ПЦР. Использованные наконечники для автоматических пипеток, одноразовая одежда, перчатки и другие загрязненные ДНК-ампликонами материалы обрабатываются реагентами, вызывающими деградацию ДНК (1N HCI, гипохлорид Nа, 10% хлорная известь, 0,2%-ный раствор ДП-2Т) с экспозицией 120 мин. Окончательную дезактивацию использованных расходных материалов и реагентов (гель, буфер для электрофореза) производят в автоклавной комнате.

Каталог: asld -> docs -> Obzor
Obzor -> Методические рекомендации Иркутск, 2010 ббк 53. 45+51. 1(2)28 С42 Утверждено Методическим советом игиува
Obzor -> Список сокращений
docs -> Правила менеджмента качества клинических лабораторных исследований medical laboratory technologies. Requirements for quality of clinical laboratory tests
docs -> Эпителиальные клетки плазматические клетки
Obzor -> Постановление 30 мая 2003 г. N 105 о введении в действие санитарно-эпидемиологических правил и нормативов санпин 1333-03
Obzor -> Что нам даёт определение специфических IgG-антител к пищевым аллергенам


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница