Исследование дурмана индейского с целью разработки нового ранозаживляющего геля



Скачать 172.82 Kb.
Дата28.04.2016
Размер172.82 Kb.
УДК 615.454.1:582.951.4:615.262.1:547.944.3

сравнительное Фитохимическое исследование дурмана индейского с целью разработки нового ранозаживляющего геля

Т.Е. КОЛИСНЫК, Г.Д. СЛИПЧЕНКО, канд. фарм. наук, доцент

Национальный фармацевтический университет, г. Харьков
Проблема лечения ран, несмотря на множество предложенных методов и препаратов, остается актуальной. При выборе лекарственного препарата для местной терапии ран следует учитывать патогенез раневого процесса. В качестве решения данной проблемы нами предлагается разработка нового ранозаживляющего геля на основе дурмана индейского (Datura innoxia Mill.) как лекарственного средства, обеспечивающего отток экссудата, а также обладающего антимикробными, противовоспалительными и местноанестезирующими свойствами. На первом этапе исследований нами проведено фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с официнальным растением Государственной Фармакопеи Украины – дурманом обыкновенным. Полученные результаты позволяют рекомендовать листья дурмана индейского в качестве сырья для создания ранозаживляющего геля.
Ключевые слова: дурман индейский, тропановые алкалоиды, ранозаживляющий гель
COMPARATIVE PHYTOCHEMICAL STUDY of Datura Innoxia in order to develop a novel wound-healing GEL

T.E. Kolisnyk, G.D. Slipchenko, PhD in pharmacy, associate professor

National Pharmaceutical University of Ukraine, Kharkov, Ukraine
The problem of treating wounds remains relevant, despite the great variety of the proposed methods and drugs. The pathogenesis of wound healing process should be taken into account for choosing a drug for topical treatment of wounds. In order to solve this problem we propose the development of a new wound-healing gel based on Datura innoxia as a drug providing the outflow of exudate, as well as having anti-microbial, anti-inflammatory and local anesthetic properties. At the first stage of the research we have carried out a phytochemical study of the leaves and seeds of Datura innoxia in comparison to officinal plant of the State Pharmacopoeia of Ukraine – Datura stramonium. The obtained results allow us to recommend the leaves of Datura innoxia as raw material to develop a wound-healing gel.
Key words: Datura innoxia, tropane alkaloids, wound-healing gel
Терапия ран и раневой инфекции занимает важное место в современной медицине. Согласно научным представлениям патогенез раневого процесса включает фазу экссудации, фазу пролиферации и фазу эпителизации, что необходимо учитывать при выборе препаратов для местного лечения ран. Так, лекарственные препараты, используемые в экссудативной фазе, должны обладать широким спектром антимикробного действия, осмотическими свойствами, чтобы поглощать раневой экссудат, а также проявлять противовоспалительное и обезболивающее действие. Перспективной лекарственной формой для лечения ран в фазе экссудации являются гели. По сравнению с мазями, гели обеспечивают интенсивный отток экссудата из глубины раны, имеют pH близкий к pH кожного покрова, быстро и равномерно распределяются по поверхности после нанесения [3, 4].

С целью местного лечения ран широко применяют антимикробные препараты, в частности антибиотики – тетрациклин, левомицетин, гентамицин и др. Их недостатком является ограничение применения из-за индивидуальной непереносимости, а также развитие устойчивой раневой микрофлоры. Одним из путей решения данной проблемы является использование антимикробных фитопрепаратов на основе календулы, прополиса, зверобоя и др. Для данных лекарственных средств характерно сочетание выраженного фармакологического действия с минимальным отрицательным воздействием на организм. К их недостаткам следует отнести отсутствие болеутоляющего действия. В связи с этим особый интерес вызывают растения рода дурман (Datura L.), обладающие антибактериальными, противогрибковыми, противовоспалительными, а также местноанестезирующими свойствами [5–9].

Поэтому целью нашей работы является разработка нового ранозаживляющего геля на основе дурмана индейского (Datura innoxia Mill.). Используя декомпозиционный подход, первым шагом исследований было предварительное фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с сырьем дурмана обыкновенного − официнального растения Государственной Фармакопеи Украины (ГФУ).

Материалы и методы исследований

Объектами исследований являлись листья и семена видов дурмана индейского и дурмана обыкновенного. Листья заготавливали в июле–августе, а семена – в течение сентября–октября 2012 г.

С помощью общеизвестных химических реакций и методик [1, 2] был проведен сравнительный качественный анализ групп биологически активных веществ (БАВ) листьев и семян дурманов индейского и обыкновенного.

Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) изучали фенольные соединения и алкалоиды исследуемого сырья.

Для определения фенольных соединений получали водно-спиртовые извлечения по следующей методике. 5,0 г измельченного растительного сырья заливали 50 мл 50 %-ного спирта и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 20 мин, после чего извлечение охлаждали и фильтровали. 5 мл фильтрата упаривали насухо, сухой остаток растворяли в 0,5 мл 96 % спирта. В качестве неподвижной фазы использовали пластину для ТСХ на алюминиевой фольге Silicagel 60 F254 с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Merck». Хроматографирование проводили в системе растворителей н-бутанол – уксусная кислота – вода (4:1:2), в качестве веществ-«свидетелей» использовали фармакопейные стандартные образцы (ФСО) рутина и кверцетина. Полученную хроматограмму обрабатывали 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида и анализировали в видимом и ультрафиолетовом (УФ) свете с длинами волн 254 и 366 нм.

Определение алкалоидов осуществляли на хроматографической пластинке на алюминиевой фольге Alugram Sil G с толщиной слоя силикагеля 0,20 мм и размерами 20х20 см производства фирмы «Macherey-Nagel» по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2].

Количественное содержание суммы флавоноидов определяли методом спектрофотометрии окрашенных комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом в пересчете на рутин [1]. Содержание суммы алкалоидов определяли методом обратной алкалиметрии по методике, изложенной в статье Государственной Фармакопеи Украины «Дурмана листья» [2] в пересчете на гиосциамин.

Результаты и обсуждение

В табл. 1 приведены результаты сравнительного анализа сырья дурманов индейского и обыкновенного.

Таблица 1

Сравнительный качественный анализ сырья видов дурмана обыкновенного и индейского

Классы БАВ

Реактивы

Лекарственное растительное сырье

листья

д. обыкно-венного



семена

д. обыкно-венного



листья

д. индейского



семена

д. индейского



Поли-сахариды

96 % этанол

+

+

+

+

Кумарины

лактонная проба

+

+

+

+

Флавоноиды

цианидиновая реакция

+

+

+

+

раствор железа (III) хлорида

+

+

+

+

Дубильные вещества (конденси-рованные)

раствор железо аммонийных квасцов

+



+



Алкалоиды

реактив Драгендорфа

+

+

+

+

раствор кислоты пикриновой

+

+

+

+

Примечание: + - присутствие, − - отсутствие классов БАВ в исследуемом сырье.

Качественный состав классов БАВ сырья исследуемых видов оказался практически идентичным. В листьях и семенах обоих видов дурмана установлено наличие полисахаридов, кумаринов, флавоноидов и алкалоидов; в листьях также обнаружены конденсированные дубильные вещества. На рис. 1 приведена схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья изучаемых видов дурмана.


20121124_203334.jpg

Рис. 1. Схема ТСХ-хроматограммы фенольных соединений сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – рутин, B – кверцетин, C – семена дурмана обыкновенного, D – семена дурмана индейского, E – листья дурмана обыкновенного, F – листья дурмана индейского; 1−15 – обозначения хроматографических зон


На ТСХ-хроматограмме фенольных соединений для листьев дурманов обыкновенного и индейского наблюдали по 3 четкие зоны для каждого вида, для семян − 4 и 3 четкие зоны для дурмана обыкновенного и дурмана индейского соответственно. Окрашивание хроматографических зон в видимом и ультрафиолетовом свете после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида не изменилось, а лишь приобрело более интенсивный характер.

Данные относительно рассчитанных величин коэффициента удержания (Rf) и окрашивания хроматографических зон в видимом и УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида для полученной хроматограммы фенольных соединений представлены в табл. 2.



Таблица 2

Величина Rf и окрашивание хроматографических зон для хроматограммы фенольных соединений

Обозначение хроматографических зон на схеме

Rf

Окрашивание хроматографических зон

в видимом свете

в УФ-свете 254 нм

в УФ-свете 366 нм

1

0,39

желтое

темно-зеленое

отсутствует

2

0,83

-//-//-

-//-//-

-//-//-

3

0,93

светло-коричневое

-//-//-

сине-зеленая флуоресценция

4

0,84

-//-//-

-//-//-

-//-//-

5

0,43

-//-//-

голубая флуоресценция

ярко-синяя флуоресценция

6

0,34

светло-желтое

желтая флуоресценция

желто-зеленая флуоресценция

7

0,91

светло-коричневое

темно-зеленое

синяя флуоресценция

8

0,82

-//-//-

-//-//-

-//-//-

9

0,53

-//-//-

-//-//-

-//-//-

10

0,92

желто-зеленое

-//-//-

отсутствует

11

0,84

зелено-коричневое

-//-//-

-//-//-

12

0,47

светло-коричневое

-//-//-

-//-//-

13

0,92

желто-зеленое

-//-//-

-//-//-

14

0,84

зелено-коричневое

-//-//-

-//-//-

15

0,46

светло-коричневое

-//-//-

-//-//-

По величине Rf и характеру хроматографического поведения в сравнении со стандартным веществом в листьях исследуемых видов идентифицирован кверцетин. По характерной флуоресценции в УФ-свете до и после обработки 10 % спиртовым раствором натрия гидроксида можно предположить, что хроматографические зоны 5, 6, 7 относятся к кумаринам и/или гидроксикоричным кислотам.

На рис. 2 приведена схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья исследуемых видов дурмана.
20130112_203123_0.jpg

Рис. 2. Схема ТСХ-хроматограммы алкалоидов сырья дурманов обыкновенного и индейского. Обозначения: A – смесь ФСО гиосциамина сульфата и скополамина гидробромида, B – листья дурмана индейского, C – листья дурмана обыкновенного, D – семена дурмана индейского, E – семена дурмана обыкновенного; 1−9 – обозначения хроматографических зон

Данные относительно рассчитанных величин Rf и окрашивания хроматографических зон в видимом свете представлены в табл. 3.

Таблица 3



Величина Rf и окрашивание хроматографических зон для ТСХ-хроматограммы алкалоидов

Обозначение хроматографической зоны на схеме

Rf

Окрашивание хроматографических зон

после обработки раствором калия йодовисмутата

после обработки раствором натрия нитрита

1

0,76

оранжевое

оранжевое

2

0,26

коричневое

красно-коричневое

3

0,75

оранжевое

оранжевое

4

0,75

оранжевое

оранжевое

5

0,26

коричневое

красно-коричневое

6

0,76

оранжевое

оранжевое

7

0,26

коричневое

красно-коричневое

8

0,77

оранжевое

оранжевое

9

0,28

коричневое

красно-коричневое

По результатам проведенного хроматографического анализа на алкалоиды в сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского идентифицированы гиосциамин и скополамин, в листьях дурмана индейского идентифицирован скополамин.

Наибольшее количественное содержание суммы флавоноидов установлено в листьях дурманов обыкновенного и индейского (3,87 ± 0,17 % и 3,20 ± 0,15 % соответственно), наименьшее – в семенах видов дурмана обыкновенного и индейского (1,15 ± 0,12 % и 1,03 ± 0,12 % соответственно) .

Наибольшее содержание суммы алкалоидов установлено в сырье дурмана индейского (0,59 ± 0,03 % и 0,41 ± 0,05 % соответственно для семян и листьев) и несколько меньше – в сырье дурмана обыкновенного (0,28 ± 0,03 % и 0,23 ± 0,02 % соответственно для листьев и семян).

Метрологические характеристики проведенных исследований количественного содержания БАВ в сырье изучаемых видов представлены в табл. 4.

Таблица 4



Метрологические характеристики определения БАВ в сырье дурманов обычного и индейского

Растительное сырье

Параметры

n





s



P

t(P,)







1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

Определение суммы флавоноидов

Листья дурмана обыкновенного

5

4

3,87

0,19

0,09

0,95

2,13

0,39

0,17

4,37

Семена дурмана обыкновенного

5

4

1,15

0,13

0,06

0,95

2,13

0,26

0,12

10,05

Листья дурмана индейского

5

4

3,20

0,17

0,08

0,95

2,13

0,34

0,15

4,70

Семена дурмана индейского

5

4

1,03

0,14

0,06

0,95

2,13

0,27

0,12

11,93

Продолжение табл. 4

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

Определение суммы алкалоидов

Листья дурмана обыкновенного

5

4

0,28

0,03

0,01

0,95

2,13

0,06

0,03

8,89

Семена дурмана обыкновенного

5

4

0,23

0,02

0,01

0,95

2,13

0,05

0,02

8,93

Листья дурмана индейского

5

4

0,41

0,06

0,03

0,95

2,13

0,12

0,05

12,80

Семена дурмана индейского

5

4

0,59

0,04

0,02

0,95

2,13

0,07

0,03

5,52

Таким образом, сравнительное фитохимическое изучение сырья видов дурмана обыкновенного и индейского выявило возможность использования сырья дурмана индейского с целью создания новых лекарственных препаратов на его основе.



Выводы

1. Проведено фитохимическое изучение листьев и семян дурмана индейского в сравнении с аналогичным сырьем официнального растения ГФУ – дурмана обыкновенного.

2. Качественное сравнение состава БАВ объектов исследования показало их подобность. С помощью методов ТСХ из фенольных соединений идентифицирован кверцетин в листьях исследуемых видов, из алкалоидов определены гиосциамин и скополамин в сырье дурмана обыкновенного и семенах дурмана индейского, а также в листьях дурмана индейского – скополамин.

3. По результатам количественного определения отдельных групп БАВ максимальное содержание суммы флавоноидов установлено для листьев дурманов обыкновенного и индейского и наименьшее – для семян обоих видов. Содержание суммы алкалоидов наибольшее для семян и листьев дурмана индейского, и меньшее – для сырья дурмана обыкновенного.



4. На основании проведенных исследований определено перспективное сырье для создания нового ранозаживляющего препарата в форме геля – листья дурмана индейского, ввиду высокого содержания БАВ, а также доступной сырьевой базы, что позволит создать эффективный и экономически целесообразный препарат на основе данного сырья.
Список литературы

  1. Государственная фармакопея СССР XI издание. Вып. 1, 2. – М.: Медицина, 1987, 1990. – 335 с., 400 с.

  2. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». – 1-е вид. – Доповнення 4. – Х.: Державне підприємство Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». – 2011. – 540 с.

  3. Лагвилава Т. О., Зиновьев Е. В., Ивахнюк Г. К. и др. Ранозаживляющие средства на основе карбополов // Известия СПбГТИ (ТУ). – 2013. – № 18 (44). – С. 47–52.

  4. Привольнев В. В., Каракулина Е. В. Основные принципы местного лечения ран и раневой инфекции // Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия. – 2011. – Т. 13.– № 3. – С. 214–222.

  5. Abbas D. A. Analgesiac, anti-inflammatory and antidiarrhoeal effects of Datura stramonium hydroalcoholic leaves extract in mice // International Journal of Research and Reviews in Applied Sciences. – 2013. – V. 14 (1). – P. 193199.

  6. Al-Sarai A. A. H., Abbas D. A., Al-Rekabi F. M. K. Some toxicological impacts and invitro antibacterial activity of Datura innoxia extract in rats // Kufa Journal For Veterinary Medical Sciences.  2011.  V. 2, N 1.  P. 132145.

  7. Kumar A., Garg B. R., Rajput G. et al. Antibacterial activity and quantitative determination of protein from leaf of Datura stramonium and Piper betle plants // Pharmacophore. – 2010. – V. 1 (3). – P. 184195.

  8. Sakthi S. S., Geetha M., Saranraj P. Pharmacological screening of Datura metel and Acalypha indica for its antifungal activity against pathogenic fungi // International journal of pharmaceutical science and health care. – 2011. – V. 2.  P. 1530.

  9. Shanmuga Priya K., Gnanamani A., Radhakrishnan N., Mary Babu // Healing potential of Datura alba on burn wounds in albino rats // Journal of Ethnopharmacology. – 2002. – V. 83.  P. 193199.

Каталог: bitstream -> 123456789
123456789 -> Значение интерлейкинов в прогрессировании хронической сердечной недостаточности у больных пожилого возраста с ишемической болезнью сердца мохамед Хассан Мохамед Сид Ахмед, асп
123456789 -> Учебное пособие Харьков 2012 министерство здравоохранения украины
123456789 -> Учебное пособие для иностранных студентов высшых фармацевтических учебных заведений и фармацевтических факультетов
123456789 -> Медицинская психология рабочая тетрадь для самостоятельной работы студентов медицинского факультета
123456789 -> Случай абсцедирующего менингоэнцефалита
123456789 -> В., Золотухина Г. А. Облитерирующий бронхиолит у детей
123456789 -> Роль полиморфизма гена Met235Thr ангиотензиногена в патогенезе хронической сердечной недостаточности и ожирения у больных ишемической болезнью сердца
123456789 -> Современные методы и апаратно-программные комплексы для оценки адаптационных возможностей и уровня здоровья организма человека
123456789 -> Учебное пособие для студентов V курса медицинских вузов IV уровня аккредитации Харьков хнму 2009
123456789 -> Практикум по русскому языку для студентов II курса стоматологического факультета


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница