Исследование клеточного состава крови с применением гематологических анализаторов



страница2/5
Дата27.04.2016
Размер400 Kb.
Просмотров75
Скачиваний0
Размер400 Kb.
1   2   3   4   5

Эритроцитарные параметры


RBC (red blood cells) - количество эритроцитов крови (х1012/л). Определение количества эритроцитов осуществляется путем вычитания из общего числа клеток в цельной крови тромбоцитов и лейкоцитов. Для исключения из счета тромбоцитов, которые имеют существенно меньшие размеры по сравнению с эритроцитами и лейкоцитами, используются пороговые значения. Считаются все частицы размером более 36 фл. Коэффициент вариации для данного параметра составляет 1-2% , а в некоторых приборах - менее 1%. Следует отметить, что иногда лейкоциты включаются в подсчет вместе с эритроцитами, но их влияние в норме незначительно, т.к. количество лейкоцитов существенно меньше (на 3 порядка - несколько тысяч) числа эритроцитов (несколько миллионов). В случаях гиперлейкоцитоза ошибка измерения эритроцитов возрастает.(таблица 1 )

Таблица 1. Возможные ошибки измерения



Ложное повышение

Ложное понижение

  • гигантские тромбоциты (с объемом более 30 фл);

  • криоглобулинемия

  • высокий лейкоцитоз (более 50х109/л)




  • агглютинация эритроцитов;

  • выраженный микроцитоз эритроцитов

  • гемолизированные образцы крови




Присутствие криоглобулинов может вызывать увеличение показателей WBC, RBC или PLT и концентрации HGB. В таких случаях следует прогреть образец крови до 37°С в течение 30 минут и немедленно провести измерение образца. Криоглобулинемия может наблюдаться у больных миеломой, макроглобулинемией Вальденстрема, злокачественными новообразованиями, лейкозом, лимфопролиферативными и аутоиммунными заболеваниями, вирусным гепатитом, сахарным диабетом.

Агглютинация эритроцитов может привести к занижению показателей RBC, увеличению MCV. Это можно проверить по повышенным значениям MCH и MCHC.



Нормобласты (NRBC) – большинство гематологических анализаторов подсчитывает все ядросодержащие клетки, поэтому при наличии нормобластов в периферической крови они определяются как лейкоциты и могут быть причиной увеличения WBC и лимфоцитов, т.к. нормобласты имеют размер малого лимфоцита. В этих случаях необходим строгий визуальный контроль и коррекция истинного количества лейкоцитов.

Например: Общее количество лейкоцитов при подсчете в анализаторе - 45х109/л. В лейкоцитарной формуле на 100 лейкоцитов имеется 50 нормобластов. Рассчитываем истинное количество лейкоцитов в крови:

150 клеток (общее количество лейкоцитов и нормобластов, полученное при подсчете лейкоцитарной формулы)



45 х 109 (количество клеток в 1 мкл, полученное при подсчете в камере или на анализаторе)


100 клеток (лейкоциты)




Х (истинный лейкоцитоз крови)

Таким образом, истинное число лейкоцитов в крови составляет 30  109/л.

В анализаторах фирмы Sysmex (XE-2100,XT-2000i) и Bayer (ADVIA 2120) при наличии нормобластов в крови, коррекция лейкоцитов проводится автоматически. Следует отметить, что порог чувствительности определения нормобластов в анализаторе Sysmex XE-2100 составляет менее 20/мкл, что с помощью микроскопического исследования определить представляется невозможным.

Нормобласты появляются в периферической крови при онкогематологических заболеваниях, анемиях (гемолитические, В12- и фолиеводефицитные), тяжелых септических состояниях и интоксикациях. Появление нормобластов в послеоперационном периоде является плохим прогностическим признаком, предсказывающим возможный летальный исход. Наличие в крови нормобластов может расцениваться как маркер гипоксии и воспаления.



HGB (hemoglobin) - концентрация гемоглобина (г/дл или г/л) в большинстве гематологических анализаторов определяется фотометрически гемиглобинцианидным или гемихромными методами. Коэффициент вариации при этом не превышает 2%.

Таблица 2.Возможные ошибки измерения



Ложное повышение

Ложное понижение

  • высокий лейкоцитоз (более 50х109/л);

  • присутствие нестабильных гемоглобинов (HbS, HbC);

  • гиперлипидемия

  • гипербилирубинемия

  • криоглобулинемия

  • гемолиз (in vivo)

  • парапротеинемия

  • резистентные к лизису эритроциты

  • Образование микросгустков в пробе крови

Основные причины завышения результатов определения гемоглобина обусловлены мутностью образца крови, которая может быть следствием:



  • гиперлипидемии и гипербилирубинемии, приема жирной пищи. Рекомендации по исследованию крови с гиперлипидемией изложены в разделе « Контроль качества работы гематологических анализаторов».

  • присутствия нелизированных эритроцитов

  • гиперлейкоцитоза. Для снижения ошибки измерения рекомендуется обработать кровь лизатом, отцентрифугировать образец и провести измерение гемоглобина в надосадочной жидкости фотометрическим методом.

В зависимости от концентрации гемоглобина выделяют три степени тяжести анемии: легкую (HGB >90 г/л), среднюю (HGB 70-90 г/л), тяжелую (HGB <70 г/л).

Повышение концентрации гемоглобина наблюдается при реактивных и опухолевых эритроцитозах, обезвоживании.

Снижение концентрации гемоглобина имеет место при анемиях, гипергидратации.

HCT (hematocrit) – гематокрит. Показатель отражает сумму прямо измеренных объемов эритроцитов в единице объема крови. Таким образом, проблемы "остаточной" плазмы (плазмы, оставшейся между эритроцитами при центрифугировании) в гематологических анализаторах по сравнению с гематокритной центрифугой не существует. Коэффициент вариации для автоматического метода - менее 1% , в сравнении с 1-2% при определении показателя методом центрифугирования.

Возможные ошибки измерения Таблица 3.

Ложное повышение

Ложное понижение

  • гигантские тромбоциты (с объемом более 30 фл);

  • криоглобулинемия

  • высокий лейкоцитоз (более 50х109/л)

  • гипергликемия ( 600 мг/дл)

  • диабетический кетоацидоз




  • агглютинациz эритроцитов;

  • выраженный микроцитоз эритроцитов ( 36 фл)



Выраженная агглютинация эритроцитов может привести к получению неправильных значений HCT, т.к. агглютинаты эритроцитов могут восприниматься прибором как лейкоциты и не учитываться при расчете гематокрита. В таких случаях рекомендуется определение гематокрита на гематокритной центрифуге.

Повышение гематокрита наблюдается при реактивных и опухолевых эритроцитозах, уменьшении объема циркулирующей плазмы (ожоговая болезнь, дегидратация). Снижение гематокритной величины имеет место при анемиях, беременности (второй триместр), гипергидратации.

При гипергликемии и диабетическом кетоацидозе отмечается гиперосмолярность плазмы крови. При разведении крови in vitro изотоническим раствором происходит быстрое набухание эритроцитов, что и вызывает завышение HCT. В этих случаях определение гематокрита на гематокритной центрифуге является более точным.

Показатели гематокрита и гемоглобина являются важными параметрами общего состояния здоровья, повышение которых, например, у спортсменов может свидетельствовать о приеме препаратов, вызывающих экзогенную стимуляцию костного мозга (введение эритропоэтина).
MCV (mean corpuscular volume) - средний объем эритроцита, выражается в кубических микрометрах (мкм3) или в фемтолитрах (1фл = 1мкм3 или 1х10 -15/л). MCV определяется большинством гематологических анализаторов благодаря прямой зависимости амплитуды электрического импульса от объема клетки. Вычисляется MCV делением суммы клеточных объемов на число эритроцитов.

В то же время MCV - это средний показатель объема всей популяции эритроцитов, содержащихся в диапазоне от 36-360 фл. Поэтому необходимо иметь в виду, что MCV может иметь нормальное значение при наличии у пациента одновременно выраженного макро- и микроцитоза, большом количестве аномальных эритроцитов (например, при серповидно-клеточной анемии; выраженном пойкилоцитозе). В этом случае особую диагностическую важность приобретает анализ эритроцитарной гистограммы и морфология клеток в мазках крови.


Возможные ошибки измерения MCV Таблица 4

Ложное повышение

Ложное понижение

  • холодовые агглютинины

  • диабетический кетоацидоз

  • гиперосмолярность плазмы

  • гипернатриемия

  • высокий лейкоцитоз (более 50х109/л)

  • длительное хранение крови (более 8 часов)

  • ретикулоцитоз

  • макротромбоцитоз




  • повышенное содержание фрагментов эритроцитов в крови вследствие механического гемолиза

  • коагулопатия потребления

При наличии агглютинации эритроцитов прибор воспринимает их как одну большую клетку, если размер их меньше верхнего порога эритроцитарного канала, что приводит к увеличению MCV. Сохранение крови in vitro и измерение таких проб при 37oС способствует получению правильных результатов.

MCV является важным показателем в дифференциальной диагностике анемий. На основании MCV анемии разделяют на нормоцитарные (MCV 80-100 фл), микроцитарные (MCV менее 80 фл) и макроцитарные (MCV более 100 фл).

MCV – показатель, отражающий изменения, возникающие в эритроцитах при длительном хранении крови. Изменения в мембране эритроцитов возникают раньше, чем в лейкоцитах и тромбоцитах, поэтому хранение крови более 8 часов вызывает увеличение MCV.

MCV меняется в течение жизни: у новорожденных достигает 128 фл, в первую неделю снижается до 100-112 фл, к году составляет 77-79 фл, в возрасте 4-3 лет нижняя граница нормы (80 фл) стабилизируется.
MCH (mean corpuscular hemoglobin) - среднее содержание гемоглобина в эритроците (пг). Рассчитывается по формуле:


MCH характеризует среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците в абсолютных единицах. В норме MCH составляет 27-31 пг. МСН - более объективный параметр, чем устаревший цветовой показатель, который не отражает синтез гемоглобина и его содержание в эритроците.

Возможные ошибки измерения. Параметр MCH является расчетным, поэтому к ложноповышенным результатам приводят все факторы, влияющие на увеличение значений гемоглобина и снижение количества эритроцитов. Ложно- пониженные результаты MCH получаются вследствие ошибок, связанных с неправильным определением числа эритроцитов (завышения их количества) и занижения концентрации гемоглобина.

Изменения MCH лежат в основе разделения анемий на нормохромные (MCH – 27-31 пг), гипохромные (MCH менее 27 пг) и гиперхромные (MCH более 31 пг). Снижение MCH наблюдается при анемиях обусловленных нарушеннием синтеза гемоглобина (железодефицитной анемии, порфирии), повышение – при макроцитарных и особенно мегалобластных анемиях.



MCHC (mean corpuscular hemoglobin concentration) - средняя концентрация гемоглобина в эритроците (г/дл). Вычисляется по формуле:

Различия между двумя последними индексами заключаются в том, что MCH указывает на массу гемоглобина в одном эритроците и выражается в долях грамма (пикограммах). MCHC показывает концентрацию гемоглобина в одном эритроците, т.е. соотношение содержания гемоглобина к объему клетки. Он отражает насыщение эритроцита гемоглобином и в норме составляет 30-38 г/дл. В отличие от МСН МСНС не зависит от клеточного объема и является чувствительным показателем нарушения процессов гемоглобинообразования.



Возможные ошибки измерения. Поскольку параметр MCHC является расчетным, то к ложно завышенным результатам приводят все факторы, влияющие на завышение значений гемоглобина и занижение гематокрита (последний связан с измерением объема эритроцитов). Ложно пониженные результаты MCHС получаются вследствие неправильного определения MCV (завышения их значения) и занижения концентрации гемоглобина.

Снижение значения MCHC наблюдается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением синтеза гемоглобина.

Повышение МСНС выше 38 г/дл встречается редко (врожденный сфероцитоз), т.к. это может закончиться кристаллизацией гемоглобина и гемолизом эритроцита. Чаще всего увеличение MCHC свидетельствует об ошибках, допущенных при измерении пробы (погрешности определения гемоглобина или MCV). Поэтому, данный параметр часто используется в качестве индикатора ошибок, допущенных на аналитическом или преаналитическом этапе работы.

Анализаторы серии “Technicon” непосредственно измеряют концентрацию гемоглобина в каждом отдельном эритроците и строят гистограммы распределения клеток не только по объему, но и по концентрации гемоглобина. При этом возрастает точность определения этого параметра и вводится новый показатель - ширина распределения эритроцитов по концентрации гемоглобина (HDW - hemoglobin distribution width), который характеризует гетерогенность эритроцитарного пула.



LHD (low hemoglobin density),% - гемоглобин низкой плотности – новый параметр, который коррелирует с процентом гипохромных эритроцитов. При наличии более 10% гипохромных эритроцитов показатель LHD > 5,5%.

Показатель LHD является индикатором железодефицитного состояния.



Hypo % – процент гипохромных эритроцитов, имеет значение в диагностике гипохромных анемий и мониторинге терапии эритропоэтином. Более 10% гипохромных эритроцитов является индикатором железодефицитного состояния.

RDW (red cell distribution width) - показатель гетерогенности эритроцитов по объему, характеризует степень анизоцитоза. Этот показатель вычисляется большинством современных гематологических анализаторов на основании гистограммы распределения эритроцитов, как коэффициент вариации объема эритроцитов:

,

где SD – стандартное среднеквадратическое отклонение объема эритроцита от среднего значения. На этот показатель влияет MCV, поэтому как при микроцитозе, так и при макроцитозе отмечается тенденция к увеличению RDW-CV.





Рис.1. Схематическое изображение распределения эритроцитов по объему (MCV), на основании которого рассчитывается показатель анизоцитоза (RDW)

В гематологических анализаторах фирмы Sysmex имеется еще один расчетный показатель RDW - это RDW-SD, который независим от MCV и представляет собой прямое измерение ширины эритроцитарной гистограммы на уровне 20% пика кривой. При этом высота пика RBC-гистограммы принимается за 100%. Норма RDW-SD -42±5 фл. Клинически значимое значение RDW- SD 60 фл.



Рис.2. Определение RDW- SD. Ширина RBC-гистограммы на уровне 20% пика кривой.

Оба показателя RDW определяют вариабельность эритроцитов по объему. Повышение RDW предполагает присутствие смешанной популяции клеток (нормоциты и микроциты или макроциты и нормоциты). RDW-SD является более чувствительным показателем при наличии минорной популяции макроцитов или микроцитов, т.к. он измеряет нижнюю часть кривой распределения эритроцитов по объему. В тоже время этот показатель будет изменяться при высоком ретикулоцитозе в силу их большого объема, что расширяет основание кривой распределения эритроцитов. RDW-CV менее чувствителен к присутствию небольшой популяции микроцитов или макроцитов или ретикулоцитов, но лучше отражает общие изменения в размере эритроцитов при макроцитарной или микроцитарной анемии.

Анизоцитоз улавливается прибором значительно быстрее, чем при визуальном просмотре мазка крови. Оценка степени анизоцитоза под микроскопом сопровождается целым рядом ошибок. При высыхании в мазках диаметр эритроцитов уменьшается на 10-20%. В толстых препаратах он меньше, чем в тонких. В то же время, показатель RDW характеризует колебания объема клеток внутри популяции и не связан с абсолютной величиной объема эритроцитов. Поэтому, при наличии в крови популяции эритроцитов с измененным, но достаточно однородным размером (например, микроциты), значения RDW могут быть в пределах нормы (11,5-14,5%). В то же время при выраженном анизоцитозе эритроцитов показатель MCV, характеризующий средний объем всей клеточной популяции, является нормальным, а RDW будет повышенным. Таким образом, сочетанное использование двух параметров - RDW и MCV- позволяет точнее характеризовать изменения в периферическом звене эритрона.



FRC(fragment red cells) (RBC-F) - подсчет фрагментов эритроцитов используется для оценки тромботических микроангиопатий.

Гистограмма – это графическое распределение различных видов клеток по их количеству и объему. Для построения гистограмм гематологические анализаторы подсчитывают миллионы клеток в одном образце, сортируют импульсы по амплитуде и распределяют частицы объемом от 24 до 360 фл по 256 каналам, каждый из которых соответствует объему частиц.

Эритроцитарная гистограмма

Как правило, регистрируемая кривая подчиняется закону нормального (гауссова) распределения. Гистограмма должна начинаться и заканчиваться на базовой линии и между нижним и верхним дискриминатором. По горизонтали откладывается объем измеряемой клетки в фл (1фл=10-15 /л), вертикальная ось на графике фиксируется как 100% шкала.

Нормальная эритроцитарная гистограмма имеет симметричную (куполообразную) форму. На некоторых анализаторах при уменьшении количества эритроцитов амплитуда гистограммы уменьшается.

При появлении патологических или нескольких популяций эритроцитов форма гистограммы меняется. Несмотря на то, что пороговое значение для эритроцитов составляет 36 фл, дополнительная область от 24 до 36 фл позволяет выявить клетки небольших размеров. Аномальное распределение эритроцитов представлено на рис.3 и4.






Рис.3 Кривая распределения RBC стартует не на базовой линии.

В этом случае тромбоциты и эритроциты не могут быть четко разделены. Возможные причины:



  • Микроэритроциты, в этом случае MCV ↓ , RDW норма или ↑

  • Гигантские тромбоциты, в этом случае MPV ↑ , PDW ↑

  • Агрегация тромбоцитов, в этом случае PLT ↓

Ошибки, получаемые в подобных ситуациях, могут существенно исказить результат исследования тромбоцитов и обычно незначительно влияют на значения эритроцитов, т.к. тромбоцитов намного меньше чем эритроцитов.






Рис.4 Сдвиг эритроцитарной гистограммы вправо.

Возможные причины:



  • Холодовая агглютинация эритроцитов (в этом случае MCHC ≥ 40 г/дл)

  • Эритробласты (в этом случае MCV↑)

Для исключения холодовой агглютинации образец необходимо подогреть до 370С и снова измерить.






Рис.5. Эритроцитарная гистограмма имеет несколько пиков.

Возможные причины:



  • Ответ на терапию препаратами железа у больных с ЖДА

  • Гемотрансфузии – эритроциты донора и пациента имеют разные размеры

  • Гиперлейкоцитоз более 600х109

В последнем случае возможно получение неправильных результатов подсчета количества эритроцитов и результат должны быть уточнен .


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

войти | регистрация
    Главная страница


загрузить материал