Исследование клеточного состава крови с применением гематологических анализаторов



страница3/5
Дата27.04.2016
Размер400 Kb.
Просмотров74
Скачиваний0
Размер400 Kb.
1   2   3   4   5

Ретикулоцитарные параметры


Ретикулоциты представляют собой незрелые эритроциты, содержащие остатки РНК и образующиеся после потери нормобластами ядер.

В связи с появлением высокотехнологичных гематологических анализаторов стало возможным получать, помимо классических, дополнительные, информативные ретикулоцитарные параметры. Аббревиатура ретикулоцитарных показателей в анализаторах различных фирм-производителей различна. В тексте приводятся обозначения, используемые в приборах Sysmex (XE-2100, XT-2000i), а также GEN-S, LH750 (Beckman Coulter).



Классические параметры ретикулоцитов

RET% - относительное количество ретикулоцитов (в %);

RET# - абсолютное количество ретикулоцитов (х109/л);

Таблица 5. Возможные ошибки измерения ретикулоцитов



Ложное повышение

  • включения в эритроцитах (тельца Жолли, малярийные паразиты)

  • высокий лейкоцитоз

  • аномальные формы гемоглобина

  • гипертромбоцитоз

  • гигантские тромбоциты

Ретикулоцитоз с резким увеличением фракции незрелых ретикулоцитов на фоне активного эритропоэза отражает повышенную регенераторную способность костного мозга. Сохраняющийся ретикулоцитоз может свидетельствовать о продолжающемся кровотечении.

Ретикулоцитопения - индикатор угнетения эритропоэза.

Нормализация абсолютного количества ретикулоцитов (RET#) - показатель восстановления пролиферативной активности эритрокариоцитов


Объемные

MCVr (Mean Cell Volume Reticulocytes) – средний объем ретикулоцитов, (фл);

MSRV (Mean Sphered Reticulocyte Volume) – средний объем сферических клеток, включающих эритроциты и ретикулоциты , фл;


  • Низкий объем ретикулоцитов объясняет появление микроцитов в периферической крови.

  • Показатели объема ретикулоцитов могут использоваться в диагностике ЖДА, мониторинге ответа на терапию железосодержащими препаратами, фолиевой кислотой, витамином В12

  • Повышение MSRV у спортсменов указывает на злоупотребление препаратами, стимулирующими эритропоэз.




  • Характеризующие степень зрелости ретикулоцитов

LFR% - популяция малых зрелых RET (87-99%),

MFR% - популяция средних RET (2-12%),

HFR% (1-2%) – популяция больших незрелых RET.
MFR+HFR определяется как фракция незрелых ретикулоцитов - IRF (Immature Reticulocyte Fraction) (2-14%). Фракция незрелых ретикулоцитов может служить индикатором активности эритропоэза.

Увеличение фракции незрелых ретикулоцитов свидетельствует об ускоренном выбросе незрелых клеток из костного мозга. Фракция незрелых ретикулоцитов повышается значительно раньше (как правило, на 2 дня), чем процент ретикулоцитов и может служить наиболее чувствительным маркером в мониторинге за состоянием эритропоэтической активности костного мозга и эффективности лечения витамином В12, фолиевой кислотой препаратами железа и ЭПО.



  • Содержание Hb в ретикулоцитах - RET-Y (расчетный показатель размера клеток по среднему значению FSC) или Ret-He (норма 28,2 –36,4 пг ) или CHr (Bayer Technicon H2) (норма 28 -32 пг )

При усилении эритропоэза из костного мозга поступают в циркуляцию незрелые ретикулоциты, период созревания которых в крови удлиняется и составляет от 1,5 до 2,5 дней. Появление незрелых ретикулоцитов в крови соответствует явлению полихромазии эритроцитов в окрашенном мазке крови
Эти физиологические особенности ретикулоцитов принимаются во внимание при расчете етикулоцитарных индексов.


  • Ретикулоцитарные индексы (RPI и CRC)

В случае изменения только гематокрита рассчитывается индекс CRC (Corrected Reticulocyte Count)- скорректированный подсчет ретикулоцитов по формуле:

, где:

Ht - гематокрит больного,

RET% - количество ретикулоцитов (%), измеренное в крови при данном гематокрите,

0,45 – идеальный гематокрит.

Если у больного одновременно с низким гематокритом (Ht) в периферической крови присутствуют незрелые ретикулоциты (MFR и HFR),то рассчитывается индекс продукции ретикулоцитов RPI (Reticulocyte production index ):

Величина RPI широко варьирует в зависимости от степени тяжести анемии, продукции ЭПО и других факторов. Снижение данного индекса менее 2 указывает на низкую пролиферативную активность эритрокариоцитов.



Исследование ретикулоцитов используется для:

  • оценки активности эритропоэза при состояниях, сопровождающихся гемолизом или кровопотерей;

  • детекции нарушения регенераторной способности костного мозга при дефиците железа, витаминов В12, В6, фолатов, меди и мониторинга соответствующей терапии;

  • оценки состояния эритропоэза на фоне лечения эритропоэтином

  • оценки способности костного мозга к регенерации после цитотоксической терапии и трансплантации костного мозга

  • оценки восстановления синтеза ЭПО после трансплантации почки

  • допингового контроля у спортсменов (прием ЭПО)


Тромбоцитарные параметры


PLT (platelet) - количество тромбоцитов (х109/л). В отличие от ручного подсчета тромбоцитов, где проводится предварительный лизис эритроцитов, автоматические счетчики крови анализируют тромбоциты и эритроциты без предварительной обработки. Это создает проблему дифференцирования больших форм тромбоцитов (макротромбоцитов) и сравнимых с ними по объему эритроцитов (микроцитов), их НаНаличие фрагментов (шизоцитов), а также фрагментов цитоплазмы лейкоцитов (клеточный дебрис).

Существует несколько механизмов, предупреждающих подсчет одних элементов вместо других. Например, в приборах, использующих кондуктометрический метод, анализируется не только высота электрического импульса, но и его форма. Существует система дискриминаторов, определяющих высоту электрического сигнала, пропорциональную размеру частицы и ширину (длительность) импульсов. Все импульсы, соответствующие размерам частиц от 1,8 до 30,0 фл подсчитываются как тромбоциты. Если доля частиц с объемами в области 30 фл превышает запрограммированный порог, то выводится на экран сообщение “Micro RBC”, либо “Macro PLT”. При этом достоверность определения количества тромбоцитов снижена.


Таблица 6. Возможные ошибки измерения

Ложное повышение

Ложное понижение

  • микроцитоз

  • криоглобулинемия

  • гемолизированные образцы крови

  • наличие фрагментов эритроцитов и лейкоцитов

  • агрегация или агглютинация тромбоцитов

  • тромбоцитарный "сателлизм" (прилипание тромбоцитов к лейкоцитам) (рис.51)

  • гигантские тромбоциты

  • агглютинация эритроцитов

  • тромбообразование

  • взятие крови с гепарином

  • гипертромбоцитоз (более 1.000 х109/л)

При агглютинации или агрегации эритроцитов тромбоциты могут оказаться в них, что приводит к снижению количества PLT. Гипертромбоцитоз (более 1.000х109/л) может превышать допустимый порог измерения PLT, что приведет к занижению показателя PLT. Это зависит от пределов линейности конкретного пробора. Гемолизированные образцы крови содержат строму эритроцитов, что приводит к повышению показателей PLT. При взятии крови с использованием гепарина или цитрата натрия в качестве антикоагулянта отмечается более выраженная агрегация тромбоцитов, что приведет к заниженному значению PLT.

Многие исследователи предлагают использовать только один стандартный антикоагулянт - К2ЭДТА в концентрации 1,5-2,2 мг на 1 мл крови. Однако и это не спасает от появления артефактов. При наличии аутоантител к тромбоцитам ЭДТА индуцирует агрегацию тромбоцитов, что проявляется псевдотромбоцитопенией. Тщательно выполненный подсчет тромбоцитов методом фазово-контрастной микроскопии обычно используется в качестве референтного метода, но и он характеризуется большим коэффициентом вариации - 7-23%. Для большинства современных гематологических анализаторов коэффициент вариации этого показателя не превышает 2-4%.



MPV (mean platelet volume) - средний объем тромбоцитов выражается в фемтолитрах (фл) или мкм3. В норме этот показатель варьирует от 7,4 до 10,4 фл и имеет тенденцию к увеличению с возрастом: с 8,6 - 8,9 фл у детей 1-5 лет до 9,5-10,6 фл у людей старше 70 лет. “Молодые” кровяные пластинки имеют больший объем, поэтому при ускорении тромбоцитопоэза средний объем тромбоцитов возрастает. В течение первых двух часов после взятия крови с ЭДТА происходит набухание тромбоцитов с изменением их объема и соответственно увеличением MPV. При наличии макротромбоцитов порог измерения для тромбоцитов может быть превышен и они не подсчитываются, что приводит к занижению MPV. Небольшие фрагменты эритроцитов и лейкоцитов могут препятствовать измерению MPV. Тромбоциты могут быть в агглютинатах эритроцитов, что приведет к ошибочным результатам MPV. Это можно проверить по аномальным значениям MCH и MCHC.

Увеличение MPV наблюдается при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, гипертиреозе, атеросклерозе, сахарном диабете, у курильщиков и лиц, страдающих алкоголизмом. Транзиторная макротромбоцитемия описана у рабочих, контактирующих с асфальтовыми испарениями, лиц, работающих с ракетным топливом. Крупные тромбоциты с аномальной морфологией появляются при миелопролиферативных заболеваниях.

Уменьшение этого показателя отмечается после спленэктомии и при синдроме Вискотта-Олдрича.

PDW (platelet distribution width), % - ширина распределения тромбоцитов по объему. Этот параметр определяется на основании гистограммы распределения тромбоцитов. PDW количественно отражает гетерогенность популяции этих клеток по размерам (степень анизоцитоза тромбоцитов). В норме этот показатель составляет 10-20%.
Увеличение PDW может быть признаком присутствия агрегатов тромбоцитов, микроэритроцитов, фрагментов эритроцитов. PDW изменяется при миелопролиферативных заболеваниях.

PCT (platelet crit - тромбокрит), % - является параметром, который отражает долю объема цельной крови, занимаемую тромбоцитами. В норме тромбокрит составляет 0,15-0,40%.

IPF- (Immature Platelet Fraction) - фракция незрелых тромбоцитов. В норме составляет 1,0-10,3%.

Фракция незрелых тромбоцитов отражает состояние костномозгового тромбоцитопоэза. IPF повышается при ДВС-синдроме, идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, регенерации костномозгового гемопоэза после химиотерапии.

MPC – (mean platelet component) – средний тромбоцитарный компонент. Новый параметр в анализаторах серии Advia 120, Advia 2120, характеризует плотность и гранулярность тромбоцитов. Норма -259±6,6.

MPC коррелирует с активностью тромбоцитарного звена и может использоваться среди других показателей в качестве предвестника острых ишемических осложнений, а также риска развития тромбоза.

Тромбоцитарная гистограмма

В норме тромбоцитарная кривая характеризуется унимодальностью и ассиметричностью. Гистограмма должна начинаться с базовой линии в области значений менее 2 фл и заканчиваться в зоне 20-30 фл. Количество тромбоцитов более 20 фл невелико.

Наличие в пробе патологических тромбоцитов (макро- или микро-), шизоцитов, микроэритроцитов, фрагментов лейкоцитов меняет форму тромбоцитарной гистограммы, что требует определенной корректировки получаемых результатов. Примеры измененных тромбоцитарных гистограмм и возможные причины, вызывающие данные изменения приведены на рис. 6,7,8

Рис.6 Тромбоцитарная гистограмма не оканчивается на базисной линии. Популяция тромбоцитов не может быть четко отделена от популяции эритроцитов.

Возможные причины:

  • микроэритроциты

  • шизоциты

  • макротромбоциты

  • агрегация тромбоцитов (несовместимость с ЭДТА, инициация свертывания образца крови)







Рис. 7Тромбоцитарная гистограмма не начинается на базисной линии.

Возможные причины:

  • Высокое фоновое значение (загрязнение реагентов)

  • Фрагменты клеток (эритроцитов, лейкоцитов)

  • Высокое количество бактерий в крови






Рис.8 Тромбоцитарная гистограмма имеет несколько пиков.

Возможные причины:

  • Анизоцитоз тромбоцитов

  • Восстановление тромбоцитарного звена после химиотерапии

  • Агрегация тромбоцитов (часто наблюдается «Зигзаг»-кривая)

Анизоцитоз тромбоцитов не влияет на результаты счета тромбоцитов. Множественные пики на тромоцитарной гистограмме могут наблюдаться при агрегации тромбоцитов, при этом результат подсчета тромбоцитов может быть ложно занижен. Для исключения ошибочного результата рекомендуется повторить исследование с цитратом натрия, который предотвращает свертывание крови в случае несовместимости образца с ЭДТА.

При выявлении патологической тромбоцитарной гистограммы следует анализировать окрашенный мазок крови.




Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

войти | регистрация
    Главная страница


загрузить материал