Материалы XV международной конференции «репродуктивные технологии сегодня и завтра» Чебоксары, 8-10 сентября 2005 года


ТЕХНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЕДЕНИЯ ПРОСПЕКТИВНОГО РЕГИСТРА ЭКО



Скачать 468.5 Kb.
страница6/10
Дата23.04.2016
Размер468.5 Kb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

ТЕХНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЕДЕНИЯ ПРОСПЕКТИВНОГО РЕГИСТРА ЭКО

В.А. Бабаев,

Санкт-Петербургский государственный университет, Врачебная Палата Шлезвиг-Гольштейн
При выборе технологии проведения лечебного цикла вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) врачу необходимо осуществить выбор типа оплодотворения яйцеклеток в зависимости от результатов обследования пациентов с последующим проведением оценки его эффективности. Существенной составляющей данного процесса является анализ результатов проведённых ранее циклов при аналогичных показаниях. Одним из вариантов накопления исходных данных является ведение национальных или международных регистров ВРТ. Наличие подобных массивов данных позволяет проводить исследования, оперируя большими объёмами исходной информации. Благодаря использованию средств электронно-вычислительной техники повышается эффективность сбора и использования информации, появляется возможность создавать банки данных объём и скорость обработки которых позволяет быстро получать ответы на интересующие вопросы и принимать более взвешенные решения.

Одним из крупнейших мировых регистров является Немецкий Регистр Экстракорпорального Оплодотворения (Deutsches IVF Register), содержащий более 500000 циклов. При этом документирование информации осуществлено в электронном виде. Одним из немаловажных критериев, характеризующих полноту и достоверность данного регистра, является его проспективность. Наличие подобного регистра и публикуемые им отчёты позволяют потребителям делать общие и независимые выводы о качестве услуг центров ЭКО и ожидаемом исходе циклов ВРТ.

При организации сбора и хранения информации в регистре ВРТ основными задачами являются следующие:

- обеспечение достоверности и непротиворечивости информации,

- приведение к единому формату данных из разных подсистем,

- сохранение врачебной тайны,

- возможность идентификации пациентов,

- минимизация расходов на разработку и сопровождение системы.

Таким образом, необходимо осуществлять кодирование данных об именах и адресах пациентов, гарантировать контроль своевременности ввода данных лечебного цикла, производить проверку наличия ошибок ввода и реализовывать возможность оперативной корректировки данных. В настоящее время все эти принципиальные положения разработаны и, в той или иной степени, реализованы и практически отработаны на базе Немецкого Регистра ЭКО. Создана технология сбора, передачи и хранения данных с проверкой их целостности и непротиворечивости, осуществлена практическая реализация модуля сбора и передачи данных с проверкой достоверности информации, внедрён программный контроль оперативности ввода и корректур данных, разработан программный комплекс учета информации лечебного цикла вспомогательных репродуктивных технологий.

ГЕНЕТИКА И СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ



ПРЕИМПЛАНТАЦИОННАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА:

СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ
Маркова Е.В.1, Артюхова В.Г.1, Светлаков А.В.1, Лебедев И.Н.2, Черемных А.Д.2

1 - Центр репродуктивной медицины, г. Красноярск; 2 – ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск


Преимплантационная генетическая диагностика (PGD – Preimplantation Genetic Diagnosis) является наиболее ранней формой пренатальной диагностики, направленной на элиминацию эмбрионов с хромосомными и генными мутациями еще до наступления беременности. Выделяют две основные формы PGD: диагностика для пациентов с высоким априорным генетическим риском в случаях носительства Х-сцепленных, аутосомных моногенных дефектов, хромосомных аномалий и, преимплантационный генетический скрининг анеуплоидий.

В настоящее время PGD возможна фактически для всех распространенных и изученных моногенных болезней, например, таких как муковисцидоз, талассемия, хорея Гентингтона, миодистрофия Дюшенна-Беккера и многих других, которые могут быть выявлены на преимплантационных этапах развития. Кроме того, развивается диагностика митохондриальных, динамических мутаций, болезней с поздним проявлением, онкологических заболеваний, осуществляется преимплатационное HLA-типирование.

Генетический скрининг для анеуплоидий выполнен более чем в 5000 клинических случаях. Разработан алгоритм и показания к проведению генетического скрининга. При невынашивании беременности, неудачных попытках ЭКО в анамнезе и возрасте женщины 35 лет и старше показано проведение РGD. Носительство сбалансированной хромосомной мутации и подозрение на гонадный мозаицизм у любого супруга также служит важным показанием к PGD. Применение PGD только для определения пола до сих пор остается спорным вопросом.

На сегодняшний день в PGD используется три основных типа биопсии: биопсия 1-го и 2-го полярных телец, биопсия бластомеров и бластоцист. Полученный материал тестируется с помощью ПЦР для выявления генных мутаций, для диагностики анеуплоидий и транслокаций применяется метод FISH. Каждый из этих методов имеет свои преимущества и недостатки, выбор и сочетание методов зависит от поставленной диагностической задачи. C целью полногеномного анализа хромосомных и геномных мутаций развиваются биочиповые технологии, сравнительная геномная гибридизация, интерфазное спектральное кариотипирование. Предложен широкий спектр вариантов полногеномной амплификации ДНК единичной клетки, позволяющей проводить практически неограниченное число самых разнообразных диагностических процедур. В клинической практике применяется метод получения метафазных хромосом единичных бластомеров и полярных телец для диагностики транслокаций.

PGD не застрахована от ошибок, источниками которых могут быть хромосомный мозаицизм в клетках эмбриона, преимущественная амплификация одного из аллелей гетерозиготного локуса (ADO – Allele Drop-Out), потеря клетки во время микроманипуляций, контаминация ДНК.

Сама процедура биопсии инвазивна, но, как считается, не служит фактором риска нарушений эмбриогенеза. Клинические исходы комбинирования экстракорпорального оплодотворения и PGD доказывают свою эффективность: PGD позволяет повысить результативность программ ЭКО, снизить риск невынашивания беременности, преодолеть бесплодие и существенно уменьшить генетический риск, а в перспективе и снизить число многоплодных беременностей. Кроме того, важно отметить, что результаты PGD дают новые знания о генетических особенностях ранних этапов эмбрионального развития человека.


ПРЕИМПЛАНТАЦИОННАЯ ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА В ПРОГРАММАХ ДОНАЦИИ ООЦИТОВ
Артюхова В.Г.1, Ильин И.Е.2, Серебренникова О.А.1, Новосельцева А.В.1,

Махалова Н.А.1

1 - Центр репродуктивной медицины, г. Красноярск; 2-IVF&PGD Center, Cyprus
Первые сообщения об использовании донорских ооцитов у человека опубликованы в 1983 году. На сегодняшний день программа донации ооцитов является высокоэффективным методом лечения бесплодия, обеспечивая частоту наступления беременности до 87% (Munne, 2005). Это позволяет предположить, что ооциты, полученные от молодых, фертильных, соматически здоровых женщин-доноров, обеспечивают формирование полноценного эмбриона и последующее наступление беременности. Однако клиническая практика показывает, что есть доноры ооцитов от которых из попытки в попытку не получены беременности, но есть доноры с высоким репродуктивным потенциалом. Также некоторыми авторами показано, что доля анеуплоидных эмбрионов, полученных в программах донации ооцитов, может быть достаточно высока (Soares, 2003).

Цель работы - оценить частоту числовых хромосомных нарушений в ооцитах и эмбрионах, полученных у молодых, фертильных, соматически здоровых женщин-доноров, а также у пациенток с бесплодием в возрасте до 35 лет.

Данное исследование выполнялось с января по август 2005 года на базе Красноярского центра репродуктивной медицины (8 циклов) и Кипрского IVF&PGD Center (13 циклов). В циклах ЭКО/ИКСИ с проведением преимплантационной генетической диагностики (ПГД) оценивали хромосомный статус ооцитов и эмбрионов двух групп: 1-ая группа – донорские программы (9 циклов), 2-ая группа – пациенты программы ЭКО/ИКСИ в возрасте до 35 лет (12 циклов). Мотивацией к проведению ИКСИ было желание пациентов, а не тяжелая патоспермия. Средний возраст доноров ооцитов составил 26,5±2,4, пациентов с бесплодием - 31,3±1,7 года. В схемах стимуляции суперовуляции использовались гонадотропины в сочетании с агонистами-ГнРг. В среднем в расчете на цикл получено 14,4±2,1 ооцитов у доноров и 17,0±2,3 ооцитов во второй группе. Частота нормального оплодотворения в донорских циклах составила 74%, во второй группе - 68%. По результатам ПГД в полость матки переносили не более 2-х эуплоидных эмбрионов.

Биопсию первого и второго полярного тельца выполняли одновременно через 16-18 часов после инсеминации - на стадии зиготы. На третьи сутки выполняли биопсию бластомера у эмбрионов, достигших 6-8 клеточной стадии развития. Для проведения FISH- диагностики использовали коммерческие наборы фирмы «Vysis» для 13, 16, 18, 21, 22 хромосом и Х, У хромосом. Полученные сигналы анализировали с помощью программ «Видео-тест» и «Quips-m-FISH».

В первой группе ПГД выполнена у 94 эмбрионов, во второй группе - у 102 эмбрионов. В группе доноров-ооцитов доля анеуплоидных эмбрионов составила 46%, во второй группе - 61%. Средняя частота формирования бластоцист среди всех обследованных эмбрионов в обеих группах не различалась и составила 66% и 67% соответственно. При этом эуплоидные эмбрионы формировали бластоцисты в 80% донорских программ и в 95% во второй группе. Аномальные эмбрионы в обеих группах сравнения сформировали бластоцисты в 48% случаев. Таким образом, формирование бластоцисты не исключает хромосомных аномалий в эмбрионе.

Частота анеуплоидий в программах донации ооцитов оказалась сопоставимой с частотой анеуплоидий в группе пациентов программ ВРТ, чей возраст не превышал 35-ти лет. При анализе частоты анеуплоидий между донорами выявлено, что у 3-х из 9-ти доноров процент анеуплоидных эмбрионов находился в пределах 21-40%, у 5-ти - в пределах 41-60%. Максимальная доля анеуплоидных эмбрионов, полученных от одного донора, составила 82%. Несмотря на малую выборку, обращает внимание тот факт, что две из 3-х клинических беременностей получены в группе доноров с частотой анеуплоидий 21-40 %.

Отмечалось достоверное увеличение количества эмбрионов с моносомиями в донорских эмбрионах и достоверное увеличение числа эмбрионов с трисомией и полиплоидией во второй группе пациентов. Число ооцитов с аномальными полярными тельцами достоверно не отличалось в обеих группах сравнения. Однако эти данные требуют дальнейшего изучения.

Таким образом, ПГД позволяет получить объективную информацию о числовых хромосомных нарушений в ооцитах и эмбрионах. Достоверные различия в частоте анеуплоидий в ооцитах и эмбрионах, полученных у фертильных, соматически-здоровых женщин-доноров и у пациентов с бесплодием в возрасте до 35 лет не выявлены. Выбор «штатного» донора, возможно, должен определяться не только по стандартным критериям отбора, но и по результатам ПГД анеуплоидий в первом стимулированном цикле.


ИЗУЧЕНИЕ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ АНОМАЛИЙ КАРИОТИПА В БЕСПЛОДНОЙ ПОПУЛЯЦИИ
Петрищев В.С., Кодылева Т.А.

Медицинская компания ИДК, Клиника лечения бесплодия, Самара.


Цель исследования: изучение частоты встречаемости аномалий кариотипа у мужчин с бесплодием.

Дизайн: ретроспективный анализ.

Пациенты: 276 мужчин, обратившихся для лечения бесплодия, с декабря 2003 по июнь 2005 год.

Исследование: по результатам клинического обследования было установлено бесплодие в паре, связанное с мужским фактором - патологией спермы. У мужчин выполнялось исследование кариотипа.

Предмет анализа: частота встречаемости аномалий кариотипа.

Результаты: исследование кариотипа было выполнено у 276 мужчин. У всех было установлено бесплодие (отсутствие беременности в паре более 1 года) и олигозооспермия (концентрация сперматозоидов менее 5 млн/мл). Частота аномалий кариотипа составила 21% (58 человек): из них частота случаев синдрома Клайнфельтера 4% (11 человек); робертсоновские транслокации 2% (5); перицентрические инверсии 1,4% (4); хромосомный полиморфизм 14% (39).

Заключение:

  • выявленная частота аномалий в популяции мужчин с олигозооспермией составила 21%, что превышает общепопуляционную частоту в 4-5 раз;

  • частота синдрома Клайнфельтера составила 4%, что превышает общепопуляционную частоту (0,2%);

  • частота хромосомного полиморфизма составила 39%, что превышает общепопуляционную частоту (4%);

  • аномалии на уровне хромосом (анеуплоидии и структурные нарушения) могут быть причиной мужского бесплодия. Это требует обязательного цитогенетического исследования у всех мужчин с концентрацией сперматозоидов менее 5 млн/мл.


ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДОИМПЛАНТАЦИОННОГО СКРИНИНГА ЧАСТО ВСТРЕЧАЮЩИХСЯ АНЕУПЛОИДИЙ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПОКАЗАНИЯХ
Логинова Ю.А., Архангельская И.Б., Корнилов Н.В., Шлыкова С.А., Гурьянова Г.В., Чежина М.В., Каменецкая Ю.К., Каменецкий Б.А., Крапивина Е.Г.

Российско-финская клиника «АВА-ПЕТЕР», Санкт-Петербург


На основании результатов более 200 циклов ЭКО с доимплантационным скринингом часто встречающихся анеуплоидий, проведенных в российско-финском медицинском центре «АВА-ПЕТЕР» с 01.04.2000 по 22.07.2005, нами проанализирована эффективность такой диагностики при различных показаниях.

Доимплантационный скрининг часто встречающихся анеуплоидий был проведен методом флуоресцентной гибридизации in situ с зондами фирмы VYSIS специфичными к хромосомам X, Y, 21, 13, 18 и в некоторых циклах дополнительно к хромосомам 16 и 22.

Показания для проведения диагностики были следующие: носительство хромосомных транслокаций, мозаицизм по половым хромосомам, возраст матери, привычное невынашивание, многочисленные неудачные попытки ЭКО, мужской фактор, желание пациентов и другие.

Опыт применения количественной флуоресцентной мультилокусной ПЦР для Преимплантационной диагностики распространенных анеуплоидий


Каталог: d pech mat konf


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница