По надзору в сфере здравоохранения и социального развития Р. У. Хабриев



Скачать 74.79 Kb.
Дата05.05.2016
Размер74.79 Kb.
Просмотров16
Скачиваний0
Размер74.79 Kb.
"УТВЕРЖДАЮ"

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере здравоохранения

и социального развития

____________________Р.У.Хабриев

"_____"_____________2005 г.
И Н С Т Р У К Ц И Я

по применению набора реагентов для определения содержания холестерина

липопротеинов высокой плотности методом осаждения в сыворотке крови

(ХОЛЕСТЕРИН ЛПВП “ДДС”)
Рекомендована к утверждению Научно-экспертным советом по медицинским изделиям.
НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для количественного определения содержания холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) в сыворотке крови человека методом осаждения в клинико-диагностических, биохимических лабораториях и научно-исследова-тельской практике.

Набор выпускается в двух видах фасовки и рассчитан, соответственно, на проведение 100 или 300 определений холестерина ЛПВП при расходе 1,0 мл реагента 1 на один анализ.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Фосфовольфрамовая кислота и ионы магния связывают хиломикроны, липопротеины очень низкой плотности и липопротеины низкой плотности в сыворотке крови. Образовавшийся осадок осаждают центрифугированием. Фракция липопротеинов высокой плотности остается в прозрачном супернатанте, в котором определяют содержание холестерина ЛПВП ферментативным фотометрическим методом при длине волны 500(480-520) нм.



СОСТАВ НАБОРА

Реагент 1: раствор, содержащий фосфовольфрамовую кислоту, 0,55 ммоль/л и магний хлористый, 25 ммоль/л – 1 флакон (100 мл) или 3 флакона (по 100 мл).

Реагент 2: калибратор (калибровочный раствор холестерина, 0,52 ммоль/л, содержащий тезит, 10% и азид натрия, 0,095%) – 1 флакон (3,0 мл) или 3 флакона (по 3,0 мл).

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Набор обеспечивает линейную область определения концентрации холестерина ЛПВП в диапазоне от 0,3 до 5,0 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность – не более 0,2 ммоль/л, коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.

Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом.

Нормальные величины концентрации холестерина ЛПВП в сыворотке крови человека составляют 0,9-1,8 ммоль/л у мужчин и 1,0-2,1 ммоль/л у женщин.

Инструкция составлена генеральным директором ЗАО “ДИАКОН-ДС”,

к.б.н. Шарышевым А. А., руководителем клинического отдела Пущинского научного центра РАН, д.м.н. Косяковой Н.И.


Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови.



МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Класс в зависимости от потенциального риска применения набора – 2б.

Реагенты 1 и 2 содержат токсичные компоненты – фосфовольфрамовую кислоту, тезит и азид натрия, соответственно. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.

Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:

– Спектрофотометр, программируемый фотометр или биохимический анализатор, длина волны 500(480-520) нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм;



  • центрифуга настольная, обеспечивающая 3000 об/мин (4000 g);

  • пробирки центрифужные вместимостью 3,0-5,0 мл;

  • пробирки стеклянные вместимостью 3,0-5,0 мл;

  • термостат, обеспечивающий температуру +37°С;

  • секундомер;

  • вода дистиллированная;

  • пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 100, 500 и 1000 мкл;

  • набор реагентов для определения общего холестерина энзиматическим методом;

– 0,9% NaCl (физиологический раствор);

– перчатки резиновые или пластиковые.



ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Реагенты 1 и 2 готовы к использованию.



ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Получение супернатанта для определения холестерина ЛПВП.

В центрифужную пробирку внести 500 мкл анализируемой сыворотки крови, добавить 1000 мкл реагента 1. Пробу перемешать и выдержать в течение 10 минут при комнатной температуре (+18-25°С), затем центрифугировать при 3000 об/мин (4000 g) в течение 10 минут при комнатной температуре.

Использовать для определения холестерина ЛПВП в сыворотке крови только абсолютно прозрачный супернатант.

Компоненты реакционной смеси (при использовании Набора реагентов

“ХОЛЕСТЕРИН ФС” фирмы ЗАО “ДИАКОН-ДС”) отбирать в количествах, указанных в таблице.
Таблица.

Отмерить, мкл

Опытная

проба


Калибровочная

проба


Контрольная

(холостая)

проба


Супернатант

100





Вода дистиллированная





100

Калибратор



100



Реагент 1 из набора “ХОЛЕСТЕРИН ФС” фирмы ЗАО “ДИАКОН-ДС”

1000

1000

1000

Пробы перемешать и инкубировать при температуре + 37°С в течение 10 минут или при комнатной температуре (+18-25°С) в течение 20 минут. Измерить оптическую плотность опытной (Еоп) и калибровочной (Екал) проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 500(480-520) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов устойчива при комнатной температуре в течение 60 минут.

При содержании триглицеридов в сыворотке крови выше 26 ммоль/л осаждение липопротеинов может быть неполным (супернатант мутный или часть осадка плавает на поверхности). Анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором в соотношении 1:1 и повторно провести осаждение липопротеинов. Полученный результат умножить на 2.

При содержании холестерина ЛПВП в сыворотке крови выше 5,0 ммоль/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором и полученный результат умножить на разведение.

РАСЧЕТЫ

Содержание холестерина ЛПВП в сыворотке крови (в ммоль/л) определить по формуле:



где: С — концентрация холестерина ЛПВП в анализируемой пробе, ммоль/л;

Еоп. — оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. пл.;

Екал. — оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. пл.;

0,52 — содержание холестерина в калибраторе, ммоль/л;


  1. коэффициент разведения сыворотки.

Примечание. Содержание холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови можно определить по схеме, основанной на формуле Фридвальда, которая надежна только при следующих условиях: пациенты не больны гиперлипопротеинемией III типа, в сыворотке крови отсутствуют хиломикроны и содержание триглицеридов не более 400 мг/дл.



Схема.





УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Хранение наборов должно производиться при температуре +2-8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25оС не более 30 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.

Срок годности набора – 12 месяцев.

Реагент 1 после вскрытия флакона может храниться при температуре +2-8оС в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флаконов.

Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2-8оС

не более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.

По вопросам, касающимся качества набора ХОЛЕСТЕРИН ЛПВП ”ДДС”, следует обращаться в ЗАО “ДИАКОН-ДС” по адресу:

142290, г. Пущино, Московской обл., пр. Науки, 5; тел. факс (0967) 33-05-54, 33-05-28

и в Институт контроля лекарственных средств ФГУ “НЦ ЭСМП” Росздравнадзора по адресу:117246, г. Москва, Научный проезд, 14, тел. (095) 120-60-95, 120-60-96.


Директор по науке и технике ЗАО “ДИАКОН-ДС”

кандидат биол. наук А.А. Шарышев.


Руководитель клинического отдела

Пущинского научного центра РАН



доктор мед. наук Н.И. Косякова.

Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

войти | регистрация
    Главная страница


загрузить материал