Применение числовых показателей спектров поглощения для оценки окрашенности лепестков цветков растений



Дата30.09.2017
Размер258 Kb.

ПРИМЕНЕНИЕ ЧИСЛОВЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СПЕКТРОВ ПОГЛОЩЕНИЯ

ДЛЯ ОЦЕНКИ ОКРАШЕННОСТИ ЛЕПЕСТКОВ ЦВЕТКОВ РАСТЕНИЙ
В.М. Колдаев1, А.Ю. Маняхин*1,2,3, О.Г. Зорикова1,2, С.П. Раилко1,2, Коляда А.С.3

1Горнотаежная станция им. В.Л. Комарова ДВО РАН, г. Уссурийск

2Межведомственный научно-образовательный центр (ГТС ДВО РАН  ВГУЭС), г. Владивосток, *E-mail: mau84@mail.ru

3Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток

Аннотация

Работа посвящена спектрофотометрии экстрактов из лепестков цветков растений. Целью работы является использование числовых показателей, полученных на основе точек перегиба контуров спектров поглощения, для идентификации окрашенности цветков. Спектры поглощения спиртовых экстрактов из красных, белых и желтых цветков 15 видов растений из 8 родов регистрировали на цифровом спектрофотометре в ультрафиолетовом и видимом диапазоне. Для зарегистрированных спектров определяли длины волн, оптические плотности, значения первых производных в точках максимумов, перегибов, ступенек контура полосы поглощения и интенсивность поглощения. Спектры поглощения извлечений из лепестков с различной окраской исследованных видов цветков растений, как из одного рода, так и из разных родов по числовым показателям имеют существенные достоверные различия. Наиболее значимые различия выявлены по таким числовым показателям как длины волн, оптические плотности в точках перегиба и значения первых производных в точках ступенек для спектров поглощения экстрактов из лепестков красных цветков, а также по длинам волн максимумов и интенсивностям поглощения – для лепестков белых и желтых цветков. Наборы числовых показателей, основанных на точках перегиба контуров полос поглощения, индивидуальны для лепестков цветков каждого вида растения. Совокупность числовых показателей спектров поглощения экстракта из лепестков может служить обобщенным идентифицирующим таксономическим признаком цветка, что целесообразно использовать в цветоводстве при сертификации вновь создаваемых сортов цветковых растений.

Ключевые слова: цветок, окраска лепестка, спектр поглощения, прикладная спектрофотометрия

Введение

Окраска лепестков цветков важнейший видовой признак растения. Стремительное развитие цветоводства ставит задачи идентификации цветков новых сортов садовых растений. Визуальные оценки окрашенности субъективны. Окраска лепестков зависит, в частности, от микроскопических выступов на их поверхности [1], температуры [2] и других факторов. Измерители цвета, применяемые в лакокрасочной и текстильной промышленности, мало пригодны, поскольку на их показания влияют фактура поверхности, увлажненность и другие внешние условия [3], стандартизовать которые для лепестков цветков затруднительно. В настоящее время актуальна разработка объективных инструментальных методов [4] применительно к оценке окрашенности цветков вновь создаваемых сортов растений. Поскольку окрашенность лепестков зависит от поглощения света хромофорами содержащихся в них пигментов [5], то данные абсорбционной спектрофотометрии экстрактов могли бы использоваться как признаки окрашенности при сертификации сортов цветковых растений в практике цветоводства.

Основными числовыми показателями оптических спектров поглощения (СП) являются длины волны (m) и оптические плотности (Am) максимумов поглощения. Дополнительными числовыми показателями (ДЧП) служат полуширина полосы, интегральная интенсивность поглощения, фактор асимметрии и другие, для определения которых традиционно используются длины волн в точках пересечения контура полосы поглощения (ПП) с уровнем половины максимума 0,5Am [6], что обычно реализуется при колоколообразных контурах СП.

Например (рис. 1, кривая Sp1), контур СП настойки лепестков белых цветков лилии обыкновенной (Lilium candidum L., семейства Liliaceae) пересекается на половинном уровне в двух точках b и c при длинах волн b и c.

Полуширина полосы поглощения (ПП) определяется как разность этих волн, а интенсивность поглощения равна площади под контуром СП в пределах указанных точек.

Рисунок 1. Спектры поглощения извлечений из лепестков белых цветков лилии обыкновенной (Sp1), красных цветков розы (Sp2) и его первая производная (D). 1, 2, 3 – точки перегиба, S1, S2 – ступеньки, 0,5Am – половинный уровень. По вертикали – оптическая плотность A и первая производная df, по горизонтали – длина волны в нм.


Однако форма контуров полос СП извлечений из растений обычно значительно отличается от колоколообразной кривой, и получить две точки пересечения контура с половинным уровнем не всегда возможно. Например (рис. 1, кривая Sp2), контур СП настойки лепестков красных цветков розы садовой (Rosahybrida `New Ton`, семейства Rosaceae) на половинном уровне пересекается только в одной точке h, и традиционные ДЧП не определяются в подобных случаях. Кроме, того, использование точек половинного уровня совершенно не применимо для ступенек, которые часто присутствуют в контурах СП цветков (см., например, рис. 1, на кривой Sp2 ступеньки S1 и S2). Возникает задача разработки способа определения ДЧП, подходящего для СП извлечений из лепестков цветков с различными формами контуров ПП. Поставленная задача решается тем, что для определения ДЧП берутся не точки «половинного уровня», а точки перегибов (ТП) контура ПП. Использование числовых показателей, полученных на их основе ТП, в спектрофотометрическом анализе извлечений из лепестков цветков применительно к оценке их окрашенности мало изучено, что послужило поводом настоящей работы.

Материал и методика

В исследованиях использовали лепестки цветков 15 видов дикорастущих и культурных растений из 8 семейств: Астровых (Asteraceae) рода Leucanthemum Mill.  нивяник обыкновенный (L. vulgare L.), рода Matricaria L.  ромашка аптечная (M. recutita L.); Ирисовых (Iridaceae) рода Iris L.  ирисы сортов: `Zime smothy`, `Blue Birds Gost`, `Mister Roberts`; Кактусовых (Cactaceae) рода Schlumbergera Lem.  кактус Шлюмбергера (S. truncate (Haw.) Moran); Капустных (Brassicaeae) рода Brassica L. – горчицу сарептскую (B. juncea (L.) Czern.); Мальвовых (Malvaceae) рода Malva L.  мальву (M. alcea L.,  hybrida `Скарлетт`); Пионовых (Paeoniaceae) рода Paeonia L.  пион уклоняющийся (P. anomala L.); Розоцветных (Rosaceae) рода Rosa L.  розы садовые сортов: `Flame-tanz`, `Alein`, `Flame King` и рода Potentilla L., лапчатку гусиную (P. anserine L.); Сложноцветных (Compositae) рода Inula L. – девясил японский (I. japonica Thunb.) и рода Heliantus L. – подсолнечник зерновой (H. annuushybrida `Орешек`). У нивяника, ромашки, девясила и подсолнечника использовали только ложноязычковые краевые цветки.

Лепестки цветков по окрашенности условно подразделили визуально на три группы  красные, белые и желтые. От разных растений одного вида отбирали по 15 цветков. Сразу после взятия из лепестков вырезали среднюю треть в апикальной части, растирали в ступке с кварцевым песком и 95%-м этанолом, настаивали во флаконах темного стекла 24 – 36 час, затем фильтровали через бумажный фильтр. СП фильтратов регистрировали на цифровом спектрофотометре UV-2501PC (Shimadzu, Япония) с шагом 1 нм в диапазоне от 220 до 550 нм. Спектры обрабатывали по специальной компьютерной программе, зарегистрированной нами в Государственном реестре интеллектуальной собственности под № 2009614442 [7]. В программе предусмотрели алгоритмы численного дифференцирования и вычисления особых точек контура ПП с учетом того, что первая производная в максимуме функции меняет знак с «+» на «», в точках перегиба достигает максимальных, а в точках ступенек минимальных по абсолютной величине значений (рис. 1, кривая D, масштаб производной df по вертикальной оси приведены к масштабу A для наглядности). С помощью указанной программы производили нормировку СП по наибольшему максимуму, вычисляли длины волн , оптические плотности A и значения производных df в ТП и ступенек контуров ПП, а также интенсивности S поглощения как интеграл в пределах длин волн ближайших от максимума слева и справа ТП. Полученные данные обрабатывали статистически по Стьюденту [8].

Результаты

Полученные данные (табл. 1) показывают, что нормированные спектры поглощения (НСП) экстрактов из лепестков визуально красных цветков имеют один максимум в ультрафиолетовом диапазоне от 270 до 290 нм, на правом склоне ПП ступеньки  одну для экстрактов из лепестков розы садовой `Flame King` (рис. 1) и мальвы `Скарлетт` или две для экстрактов остальных исследованных лепестков, соответственно две или три ТП со своими динами волн, оптическими плотностями, а также интенсивностями поглощения полос; всего 12  17 числовых показателей. Зарегистрированные СП различаются по числовым показателям. Так, среди числовых показателей НСП извлечений из лепестков роз `Flame-tanz` и `Alein` наибольшие различия по длинам волн для 1-й ступеньки на правом склоне достигают 62, для 1 – 3-й точек перегиба на правом склоне контура первой ПП составляют от 22 до 36 нм. Оптические плотности

в точках 1-й и 2-й ступенек различаются 3,35 – 6, во 2-й и 3-й ТП в 3, 33 – 3,87, и по величине первой производной df ступенек в 1,22  1,73 раза. При этом интенсивности S поглощения полос отличаются в 2,85 раза. Из 17 числовых показателей статистически совпадают только 6, остальные различаются достоверно (p < 0,05).

Аналогичные результаты получены и для пиона уклоняющегося, в СП извлечений из лепестков которого среди 17 числовых показателей различия недостоверны только для 5: оптической плотности максимума, длин волн левой, а также 1-й и 2-й правых ТП, интенсивности поглощения, остальные различаются достоверно. В СП извлечений из лепестков мальвы `Скарлетт` недостоверно различаются всего лишь 3 показателя: оптическая плотность максимума, величины первой производной первой ступеньки и интенсивности поглощения, остальные различия достоверны (p < 0,05). Кроме того, следует отметить, что в СП излечения из лепестков этого растения только одна ступенька в отличие от СП извлечений из лепестков цветков, приведенных выше растений (табл. 1).



Рисунок 2. Спектры поглощения экстрактов из лепестков цветков красных розы садовой `Flame King` (1), белых краевых цветков ромашки аптечной (2) и желтых цветков лапчатки гусиной (3). Маркерами обозначены точки перегиба, стрелками  ступеньки, по вертикали  оптическая плотность A в отн. ед., по горизонтали  длина волны в нм.


Из полученных данных видно, что НСП извлечений из лепестков визуально белых цветков включают две ПП с максимумами в УФ диапазоне 261 – 271 и 329 – 346 нм соответственно. Контуры ПП гладкие, без ступенек (табл. 2) или. Контур ПП имеет обычно 2 или 3 и соответственно гладкий, без ступенек (табл. 2) или с одной ступенькой (рис. 2, кривая 2) на правом склоне второй ПП. Каждая ПП характеризуется интенсивностью S поглощения. Для этих спектров получено 14 числовых показателей.

Судя по полученным данным, зарегистрированные НСП различаются по многим числовым показателям. Среди числовых показателей НСП извлечений из лепестков белых ирисов, использованных сортов, различия по длине волны максимумов составляют 10 – 17 нм, правых ТП различаются на 9 – 12 нм, а интенсивности поглощения различаются в 1,37 – 1,52 раза. Оптические плотности всех ТП и вторых максимумов различаются в 1,03 – 1,46 раза, а для первых максимумов статистически совпадают. При этом для шести из 14 числовых показателей достоверных отличий не обнаружено, остальные отличаются достоверно (p < 0,05).

Аналогичные результаты получены для НСП извлечений из лепестков нивяника обыкновенного и кактуса Шлюмбергера, у которых совпадения только по длине волны 1-го максимума, интенсивностей поглощения обеих полос, оптической плотности первого максимума. Другими словами из 14 полученных показателей недостоверных отличий только 4, остальные различаются достоверно (p < 0,05).

Полученные данные свидетельствуют о том, что контуры НСП извлечений из визуально желтых лепестков имеют вид, включающий 5 (табл. 3) или больше ПП (рис. 2, кривая 3) без ступенек, гладких или с одной-двумя ступеньками.

Первые максимумы находятся в УФ диапазоне 265 – 360 нм, а последние три максимума в «синей» области видимого диапазона 413 – 461 нм и составляют, так называемую, «синюю триаду». Средние максимумы «триады» имеют близкие длины волн (437 – 439 нм) и наибольшую оптическую плотность, по которой превышают своих соседей на 9 – 27%. Длины волн первых максимумов «триады» различаются всего лишь на 3 – 8 нм, а третьих максимумов совпадают. Значения других числовых показателей контуров ПП «триады» соответственно близки. Приведенные данные указывают на то, что максимумы «триады» обусловлены хромофорами веществ каротиноидной природы. Вероятно, такими веществами являются производные лютеина, которые и обеспечивают в основном желтую окраску лепестков исследованных цветков. Каротиноиды (наряду с флавоноидами) характерны для подавляющего большинства желтых цветков растений из самых разных родов и семейств: бархатцев [9], шафрана посевного [10], томатов [11], тюльпанового дерева [12], искусственно выведенной эустомы [13], орхидей [14] и других [15]. В связи с указанным максимумы «триады» вряд ли могут служить отличительными признаками при анализе СП извлечений из цветков этой группы, и в дальнейшем не рассматриваются.

Для идентификации НСП излечений из визуально желтых лепестков можно воспользоваться числовым показателям контуров первых ультрафиолетовых ПП. Для них получено 14 числовых показателей, из которых различия недостоверны только для 5, а именно для длин волн и оптических плотностей первого максимума, длин волн левых ТП контуров первой и второй ПП, а также интенсивности поглощения первой ПП (табл. 3); остальные числовые показатели различаются достоверно (p < 0,05).

НСП извлечений из лепестков разной окраски исследованных цветков растений как из одного рода (Iris L., Rosa L.), так и разных родов различаются достоверно. Совокупность числовых показателей, основанных на точках перегиба контуров СП, характерна, индивидуальна для окраски лепестков цветков каждого вида растения.

Следует также заметить, что спектрофотометрическая идентификация окраски лепестков по числовым показателям СП по сравнению с другими методами (например, тонкослойной хроматографией) довольно проста, не требует дополнительных реактивов, кроме экстрагента. На получение числовых показателей затрачивается около 8 мин для одного СП, и при этом погрешность цифрового спектрофотометра, как известно [16], не превышает ±0,004 A.

Выводы

1. Предлагаемая оценка окрашенности лепестков цветков по числовым показателям НСП экстрактов из них сравнительно малотрудоемкий, достаточно точный способ.



2. Совокупность числовых показателей НСП составляет спектрофотометрический «портрет» или паспорт извлечения из лепестков, который является уникальным для цветков одного вида растения и может служить обобщенным таксономическим признаком.

3. Разработанный способ спектрофотометрической оценки на основе традиционных и нетрадиционных (точек перегиба и ступенек) числовых показателей в дальнейшем целесообразно использовать в цветоводстве при описании и сертификации вновь создаваемых сортов цветковых растений.

Литература

1. Feng, L., Zhang Y., Li M. et al. The structural color of red rose petals and duplicates. Langmuir, 2010, v. 26(18), p. 14885 – 14888.

2. Mu J., Li G., Sun S. Petal color, flower temperature and behavior in an Alpine annual herb Gentiana leucomelaena (Gentianaceae). Arctic, Antarctic, and Alpine research, 2010, v. 42(2), p. 219 – 226.

3. Домасев М.В., Гнатюк С.П. Цвет, управление цветом, цветовые расчеты, измерения. – СПб.: Питер, 2009. 224 с.

4. Rustioni L., Basilico R., Floris S. et al. Grape color phenotyping: development of a method based on the reflectange spectrum. Phytochemical analysis, 2013, v. 24, No 5, p. 453 – 459.

5. Беликов В.Г. Анализ лекарственных веществ фотометрическими методами. Опыт работы отечественных специалистов // Российский химический журнал, 2002. Т. XLVI, № 4. С. 52 – 56.

6. Гавриленко В.Ф., Жигалова Т.В. Большой практикум по фотосинтезу. М.: «Академия», 2003. 256 с.

7. Колдаев В.М., Зориков П.С., Бездетко Г.Н. Спектры // Электронный бюллетень программ для ЭВМ, баз данных, топологии микросхем. 2009, № 4, С. 215.

URL: http://www1.fips.ru/Electronic_bulletin/Programs_db_topology/01_PR/pdf (дата обращения 06.03.2016).

8. McDonald J.H. Handbook of biological statistics. Sparky House Publishing, Baltimore, Maryland. 2014. 326 p.

9. Lin J.-H., Lee D.-J., Chang J.-S. Lutein production from biomass: marigold flowers versus microalgae. Bioresourse Technology, 2015, v. 184, p. 421 – 428.

10. Goupy P., Vian M.A., Chemat F., Caris-Veyrat C. Identification and quantification of flavonols, anthocyanins and lutein diesters in tepals of Crocus sativus by ultra performance liquid chromatography coupled to diode array and ion trap mass spectrometry detections. Industrial Crops and Products, 2013, v. 44, p. 496 – 510.

11. Ariizumi T., Kishimoto S., Kakami R. et al. Identification of the carotenoid modifying gene Pale yellow petal 1 as an essential factor in xanthophylls esterification and yellow flower pigmentation in tomato (Solanum lycopersicum). The Plant Journal, 2014, v. 79, is. 3, p. 453 – 465.

12. Yang Y., Xu M., Luo Q et al. De novo transcriptome analysis of Liriodendron chinense petals and leaves by Illumina sequencing. Gene, 2014, v. 534, is. 2, p. 155 – 162.

13. Liu H., Kishimoto S., Yamamizo C. et al. Carotenoid accumulations and carotenogenic gene expressions in the petals of Eustoma grandiflorum. Plant Breeding, 2013, v. 132, is. 4, p. 417 – 422.

14. Wang L., Albert N.W., Zhang H. et al. Temporal and spatial regulation of anthocyanin biosynthesis provide diverse flower colour intensities and patterning in Cymbidium orchid. Planta, 2014, v. 240, is. 5, p. 983 – 1002.

15. Ohmiya A. Qualitative and quantitative control of carotenoid accumulation in flower petals. Sciena Horticulturae, 2013, v. 163, No 5, p. 10 – 19.

16. Спектрофотометры исследовательского класса. URL:



http://www.altey.kz>/...Shimadzu/ (дата обращения: 18.03.2016).

Таблица 1.

Числовые показатели СП извлечений из визуально красных лепестков цветков

разных растений



Показатели

Растения

Роза, сорт

Пион уклоняющийся

Мальва `Скарлетт`

`Flame-tanz`

`Alein`

lm

270±1

277±1

279±1

290±1

Am**

1±0,022

1±0,019

1±0,018

1±0,016

ТТП

слева

l

262±1*

268±1

263±1*

279±1

A

0,931±0,076*

0,937±0,056*

0,742±0,062

0,810±0,063

справа

1

l

273±1

306±1*

307±1*

304±1

A

0,985±0,058

0,534±0,032

0,659±0,048

0,725±0,068

2

l

306±1

342±1*

341±1*

348±1

A

0,580±0,024

0,150±0,008

0,287±0,016

0,250±0,012

3

l

337±1

359±1

387±1

нет

A

0,323±0,014

0,097±0,005

0,083±0,006

Ступенька

справа


1

l

277±1

339±1

325±1

327±1

A

0,966±0,071

0,161±0,005

0,415±0,018

0,350±0,022

df

-0,0027*

±0,00018


-0,0033

±0,00028


-0,0069

±0,00056


-0,0026*

±0,00017


2

l

333±1

358±1

372±1

нет

A

0,332±0,028

0,099±0,007

0,118±0,009

df

-0,0015

±0,00012


-0,0026

±0,00022


-0,0020

±0,00018


S

11,7±1,2

33,3±2,8

24,4±1,8*

25,9±2,1*

(Примечание: недостоверные различия *  между парой данных, **  между данными всей строки при p > 0,05)

Таблица 2.



Числовые показатели СП извлечений из визуально белых лепестков цветков разных растений

№ полосы

Показатели

Растения

Нивяник обыкновенный

Ирис садовый, сорт

Кактус Шлюмбергера

`Zime smothy`


`Blue Birds Gost`

1

lm

269±1*

261±1

271±1*

268±1*

Am

0,745±0,061

1±0,021*

1±0,024*

1±0,023*

ТП

левая

l

252±1

255±1*

256±1*

263±1

A

0,540±0,048

0,962±0,082*

0,934±0,056

0,961±0,078*

правая

l

273±1

262±1

277±1

285±1

A

0,673±0,045

0,998±0,076

0,906±0,084

0,752±0,066

S

7,9±0,5*

11,9±1,2

8,7±0,4*

21,2±1,3

2

lm

334±1

346±1*

329±1

344±1*

Am

1±0,022

0,893±0,079

0,934±0,071

0,577±0,042

ТП

левая

l

312±1*

315±1

311±1*

324±1

A

0,742±0,066

0,647±0,063

0,790±0,053

0,498±0,034

правая

l

361±1

378±1

387±1

372±1

A

0,559±0,072

0,567±0,044

0,388±0,029

0,363±0,031

S

33,1±1,8*

50,4±4,3

33,1±2,1*

25,9±1,2

(Примечание: *  недостоверные различия между данными при p > 0,05)

Таблица 3.



Числовые показатели СП извлечений из визуально желтых цветков разных растений

№ полосы

Показатели

Растения

Ирис `Mister Roberts`

Девясил японский

Горчица сарептская

Подсолнечник зерновой`Орешек`

1

lm

273±1

297±1

265±1*

267±1*

Am

1±0,012*

0,937±0,076

1±0,014*

0,645±0,048

ТП

левая

l

266±1

277±1

263±1*

263±1*

A

0,922±0,078

0,736±0,056

0,991±0,082

0,608±0,048

правая

l

277±1

301±1

273±1

282±1

A

0,952±0,076

0,932±0,074

0,803±0,063

0,505±0,042

S

11,7±1,1*

21,8±1,8

10,3±0,8

11,6±0,9*

2

lm

332±1

323±1

360±1

326±1

Am

0,911±0,082

1±0,014

0,520±0,046

0,364±0,024

ТП

левая

l

312±1*

314±1*

345±1

324±1

A

0,864±0,072

0,960±0,081

0,479±0,036

0,359±0,028

правая

l

362±1

347±1

0,386±1

331±1

A

0,653±0,054

0,628±0,051

0,433±0,038

0,334±0,026

S

45,4±3,9

30,5±2,8

20,6±1,6

2,8±0,1

3

lm

413±1

424±1

416±1*

416±1*

Am

0,301±0,018

0,181±0,012

0,561±0,042

0,693±0,054

ТП

левая

l

405±1

414±1

407±1

384±1

A

0,294±0,018

0,173±0,009

0,473±0,032

0,314±0,022

правая

l

419±1*

425±1

420±1*

419±1*

A

0,291±0,018

0,181±0,011

0,547±0,042

0,682±0,051

S

3,8±0,2*

2,1±0,1*

7,5±0,6

9,7±0,8

4

lm**

437±1

439±1

439±1

438±1

Am

0,306±0,028

0,193±0,008

0,781±0,062

1±0,012

ТП

левая

l**

431±1

433±1

431±1

430±1

A

0,290±0,018

0,187±0,012

0,628±0,052

0,816±0,074

правая

l**

447±1

449±1

449±1

447±1

A

0,260±0,018

0,168±0,011

0,632±0,054

0,819±0,074

S

5,0±0,4

3,2±0,2

13,7±1,1

16,7±1,4

5

lm**

467±1

468±1

469±1

467±1

Am

0,244±0,021

0,147±0,011

0,729±0,062

0,912±0,081

ТП

левая

l

461±1*

453±1

463±1*

461±1*

A

0,222±0,018

0,140±0,009

0,611±0,056

0,774±0,064

правая

l

476±1*

480±1

477±1*

475±1*

A

0,173±0,008

0,097±0,007

0,490±0,032

0,610±0,056

S

3,6±0,2*

2,4±0,1*

9,8±0,8

12,3±0,9

(Примечания. Недостоверные различия: *  между парой данных, **  между данными всей строки при p > 0,05)
Каталог: files
files -> Вопросы сертификационного экзамена для врачей по специальности «лфк и спортивная медицина»
files -> Рабочая программа составлена в соответствии с Требованиями к содержанию дополнительных профессиональных образовательных программ
files -> Рабочая программа дисциплины Лечебная физическая культура и массаж Направление подготовки 050100 Педагогическое образование
files -> Лечебная физкультура
files -> К рабочей программе дисциплины «Лечебная физкультура и спортивная медицина»
files -> Рабочая программа учебной дисциплины «медицинская реабилитация» цикла Медицинская реабилитация для специальности 310501 «Лечебное дело» по специализации 310501 «Лечебное дело»
files -> Лекции (час) Семинары (час) Самост работа Всего баллов Модуль 1
files -> Влияние мобильного телефона на здоровье человека


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница