Создание дифференцирующей системы для количественного определения вируса Повассан в смеси с другими вирусами рода Flavivirus



Скачать 18.81 Kb.
Дата24.10.2018
Размер18.81 Kb.

Создание дифференцирующей системы для количественного определения вируса Повассан в смеси с другими вирусами рода Flavivirus

Иванников Роман Игоревич, Литов Александр Геннадьевич
Кафедра вирусологии Биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова; Лаборатория биологии арбовирусов ФГБНУ ИПВЭ им. М.П.Чумакова, г. Москва


E-mail: ivannikov_ra@mail.ru

На Дальнем Востоке России описаны очаги, где циркулирует сразу несколько флавивирусов: вирус клещевого энцефалита, вирус Повассан, вирус японского энцефалита. Переносчиками вируса в РФ являются клещи Ixodes persulcatus, также связанные с распространением вируса клещевого энцефалита в этом регионе. В связи с общностью переносчика становится возможным совместное инфицирование обоими вирусами и возникновение смешанной инфекции. Согласно данным д-ра Леоновой, на их долю приходилось 4,3 процента всех больных энцефалитом, обследованных в 1976-1978 годах, что соответствовало числу больных с моноинфекцией, вызванной вирусом Повассан.



Задачей данной работы было создание тест-системы, позволяющей определять количество копий РНК вируса Повассан в смеси с вирусом клещевого энцефалита и другими флавивирусами. Для дизайна праймеров на основании выравнивания последовательностей геномов вирусов Повассан и клещевого энцефалита были выбраны наиболее различающиеся между видами фрагменты, по которым с помощью сервиса PrimerBLAST были подобраны пары праймеров для специфичной амплификации вируса Повассан. После оптимизации системы по температуре отжига праймеров и содержанию ионов магния, пары праймеров прошли проверку на специфичность против пяти генотипов вируса клещевого энцефалита, а также с флавивирусами Лангат, омской геморрагической лихорадки, желтой лихорадки, Сент-Луиса, шотландского энцефаломиелита овец, Западного Нила и японского энцефалита. Для наиболее специфичной пары был подобран TaqMan-зонд, после чего была проведена дополнительная проверка на специфичность системы с указанными выше вирусами, а также с десятью арбовирусами, не входящими в семейство Flaviviridae. Для определения количества копий РНК вируса были созданы стандарты путем разведения очищенной в градиенте плотности сахарозы вирусной РНК, являющейся in vitro транскриптом первой тысячи нуклеотидов генома вируса Повассан. Для контроля качества выделения вирусной РНК в пробу добавляли известное количество вакцинного штамма Sabin1 вируса полиомиелита в качестве внутреннего стандарта. Определение количества копий РНК полиовируса определялось с помощью системы, предложенной ранее.

В результате нами были получена тест-система для проведения количественной оценки содержания копий РНК вируса Повассан в смеси с другими вирусами рода Flavivivrus.
Каталог: archive -> Lomonosov 2016 -> data
archive -> Методические указания для студентов-иностранцев и врачей-интернов Харьков хгму 2005
archive -> Недостаточность кровообращения
archive -> Даши чойнхорлин
archive -> Учебно-методическое пособие для самоподготовки по теме: «Сестринский уход при асфиксии, родовых травмах, перинатальной энцефалопатии новорожденных детей»
data -> Конференция «Ломоносов 2016» Секция «Масс-медиа в России и мире»
data -> Динамика кровотечения и роста сгустка фибрина в модели гемостаза на мышах
data -> Кузнецова Я. А. 1, Демина В. А. 2,3
data -> Разработка новых лекарственных форм противотуберкулезных препаратов пролонгированного действия на основе левофлоксацина и моксифлоксацина с применением скф технологий
data -> Новые подходы к увеличению чувствительности латерального проточного иммуноанализа Серебренникова Ксения Вячеславовна
data -> Исследование порошков для создания биорезорбируемых материалов в системе трикальцийфосфат карбонат кальция


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница