Бнт экзамен. Каковы причины развития бионанотехнологии



Скачать 347.58 Kb.
страница2/5
Дата30.04.2016
Размер347.58 Kb.
1   2   3   4   5

Ферменты, или энзимы  — обычно белковые молекулы или молекулы РНК (рибозимы) или их комплексы, ускоряющие (катализирующие) химические реакции в живых системах. Реагенты в реакции, катализируемой ферментами, называются субстратами, а получающиеся вещества — продуктами. Ферменты специфичны к субстратам (АТФаза катализирует расщепление только АТФ, а киназафосфорилазы фосфорилирует только фосфорилазу). Ферментативная активность может регулироваться активаторами и ингибиторами (активаторы — повышают, ингибиторы — понижают). Белковые ферменты синтезируются на рибосомах, а РНК — в ядре. Ферменты присутствуют во всех живых клетках и способствуют превращению одних веществ (субстратов) в другие (продукты). Ферменты выступают в роли катализаторов практически во всех биохимических реакциях, протекающих в живых организмах. Они играют важнейшую роль во всех процессах жизнедеятельности, направляя и регулируя обмен веществ организма. Подобно всем катализаторам, ферменты ускоряют как прямую, так и обратную реакцию, понижая энергию активации процесса. Химическое равновесие при этом не смещается ни в прямую, ни в обратную сторону. По типу катализируемых реакций ферменты подразделяются на 6 классов согласно иерархической классификации ферментов (КФ, EC — EnzymeComissioncode). Каждый класс содержит подклассы, так что фермент описывается совокупностью четырёх чисел, разделённых точками. Например, пепсин имеет название ЕС 3.4.23.1. Первое число описывает механизм реакции, катализируемой ферментом: КФ 1: Оксидоредуктазы, катализирующие окисление или восстановление. Пример: каталаза, алкогольдегидрогеназа. КФ 2: Трансферазы, катализирующие перенос химических групп с одной молекулы субстрата на другую. Среди трансфераз особо выделяют киназы, переносящие фосфатную группу, как правило, с молекулы АТФ. КФ 3: Гидролазы, катализирующие гидролиз химических связей. Пример: эстеразы, пепсин, трипсин, амилаза, липопротеинлипаза. КФ 4: Лиазы, катализирующие разрыв химических связей без гидролиза с образованием двойной связи в одном из продуктов. КФ 5: Изомеразы, катализирующие структурные или геометрические изменения в молекуле субстрата. КФ 6: Лигазы, катализирующие образование химических связей между субстратами за счёт гидролиза АТФ. Пример: ДНК-полимераза. Иммобилизация белков (ферментов) – суть ограничение подвижности данных биомолекул. Иммобилизация биомолекул является одним из основных методов биотехнологии. Цели иммобилизации весьма разнообразны: это может быть перевод биокатализатора в гетерогенное состояние; стабилизация биокатализатора и/или придание новых функциональных или структурных свойств для более эффективного использования в биокаталитическом процессе. При иммобилизации ферменты из разряда гомогенных катализаторов переходят в разряд гетерогенных или микрогетерогенных. Другим, не менее важным аспектом, является придание белкам по средствам образования надмолекулярных структур требуемых физико-химических свойств (гидродинамические свойства, пространственная ориентация биомолекул, агрегатное состояние). Каковы основные преимущества применения методов иммобилизации (инкапсулирования) при разработке новых лекарственных форм? Адресная доставка. Первое и главное преимущество - включение лекарственных препаратов в наносистемы позволяет осуществлять адресную доставку лекарства. Это может реализоваться за счет целенаправленного подбора размеров наночастиц. Например, размер наночастиц может быть больше диаметра пор капилляров, тогда объем распределения наночастиц, содержащих лекарство ограничивается компартаментом введения. Например, при внутривенном введении наночастицыплохо проникают в здоровые органы и ткани, но хорошо проникают в очаги воспаления, т.к. вблизи очагов воспаления капилляры, снабжающие эти области кровью, сильно перфорированы. Этот процесс называется пассивное нацеливание. Пролонгированное действие лекарства. Важное преимущество наночастиц как лекарственной формы - постепенное высвобождение лекарственного вещества, инкорпорированного в них, что увеличивает время его действия. Биосовместимые материалы для получения фермент-содержащих надмолекулярных систем, применяемых в биотехнологии и медицине.Среди основных требований предъявляемых к носителям предназначенным для применения в биологии и медицине отметим следующие: (1) возможность синтезировать требуемые системы в мягких условиях; (2) возможность контролировать свойства синтезируемых систем (структуры, размера, гидродинамических свойств, прочности); (3) возможность включения целевых биомолекул в мягких условиях; (4) возможность придавать системам желаемые функциональные свойства (например, флуоресцентные или магнитные) путем включения в микро- (нано)капсулы или на их поверхность соответствующих компонентов (например, квантовых точек); (5) биосовместимость и биодеградируемость материалов; (6) стабильность. Материалы, используемые в качестве носителей при иммобилизации биокатализаторов, чрезвычайно разнообразны. При получении фермент-содержащих надмолекулярных систем предназначенных для применения в биологии и медицине в качестве носителей наиболее пары природных полисахаридов, альгиновая кислота, каррагенан, пектин, хитозан; а также это могут быть белки, которые в силу своих амфотерных свойств в зависимости от рН могут являться как поликатионами, так и полианионами; для приготовления функциональных систем на основе липосом используются природные липиды – компоненты биомембран. Преимущество природных соединений перед синтетическими полимерами в том, что они биосовместимы, нетоксичны и биодеградируемы в физиологических условиях. Альгинаты, соли альгиновой кислоты, широко используется для получения микро- и

нанокапсул многих биоактивных молекул, ферментов, вакцин, инсулина и цитокинов.



11. Укажите особенности белков, нуклеиновых кислот, липидов, углеводов как бионанообъектов.

Размеры большинства атомов лежат в интервале от 0.1 до 0.2 им.Наночастица (англ. nanoparticle) - это изолированный твердофазный объект, имеющий отчетливо выраженную границу с окружающей средой, размеры которого во всех трех измерениях составляют от 1 им до


100 им.Многие биообъекты можно классифицировать как наночастицы.Белки, характерные размеры которых лежат в диапазоне между 4 и 50 нм.находятся внизу нанометрового диапазона. Строительные блоки белков - 20 протеиногенных аминокислот, имеют размеры порядка 1 нм и
также попадают в число бионанообъектов. Нуклеиновые кислоты, и. прежде всего. ДНК как носитель генетической информации, являются полимерами, состоящими из мономеров-нуклеотидов. Молекула ДНК представляет собой двойную наноспиральдиаметром 2 нм и шагом 3,4 нм. на который приходится 10 пар нуклеи-
новых оснований. К биологическим нанообъектам относятся молекулы белков, нуклеиновых кислот(ДНК, РНК), полисахаридов и липидов, формирующие внутриклеточный каркас (цитоскелет) ивнеклеточный матрикс, мембранные каналы, рецепторы и переносчики, систему внутриклеточной сигнализации, молекулярные машины для синтеза, упаковки и утилизации белков и нуклеиновых кислот, производства энергии, внутриклеточного транспорта и движения клеток. Размер белковых молекул и надмолекулярных белковых комплексов колеблется от 1 до 1000 нм. Диаметр спирали ДНК составляет 2 нм, а ее длина может достигать нескольких сантиметров. Белковые комплексы, формирующие нити цитоскелета, имеют толщину 7–25 нм при длине до нескольких микрон. Белковые комплексы, образующие поры, достигают 120 нм в диаметре. Внеклеточные структуры также могут иметь наноразмерные характеристики. Так, экзосомы, везикулы, переносящие материал между клетками, имеют диаметр 65–100 нм, а частицы липопротеинов плазмы крови, транспортирующие липиды в организме, — 8–50 нм. Липосомы находят широкое применение в качестве наноносителей для ферментов и лекарственных препаратов, что обусловлено главным образом близостью свойств липидных носителей и природных биомембран. По своей природе входящие в состав биологических мембран липиды можно разделить на три класса: фосфолипиды, гликолипиды и нейтральные липиды, основным представителем которых является холестерин. Мицеллы представляют собой практически идеальную среду для выделения и проведения структурных исследований мембранных белков. Типичный диаметр мицелл равен  4-10 нм, гидрофобные углеводородные «хвосты» молекул мицелл изолированы от контактов с водой полярными «головами».  Биология и нанотехнологии имеют обширный «интерфейс». Как следует из вышеперечисленного, биологические системы состоят из наноразмерных строительных блоков и молекулярных машин (моторов). Их организация и принципы работы представляют непочатый край новых подходов и структур для нанотехнологий. Вместе с тем, нанотехнологии обеспечивают биологию инструментарием и технологиями для изучения организации живого на молекулярном уровне. Соразмерность биологических структур и искуственныхнаноматериалов, с одной стороны, может определять биологические и токсические свойства последних. С другой — биологические структуры могут использоваться для конструирования новыхнаноустройств.

12. Как сплайсосомы, протеосомы, рибосомы участвуют в бионанотехнологиях.

По молекулярным стандартамсплайсосома – большая биомашина, сделанная из пяти молекул РНК и 100 или более белковых субъединиц, которые шаг за шагом собираются в гигантский комплекс, когда сплайсосоме пора приступать к работе.Сплайсосому составляют пять малых ядерных рибонуклеопротеинов (мяРНП) и некоторое количество дополнительных белковых факторов. Содержащиеся в сплайсосомемяРНП называются U1, U2, U4, U5 и U6. Они участвуют во многих взаимодействиях между молекулами РНК, а также между РНК и белками. В общем случае сборка сплайсосомы происходит заново для каждой мРНК-предшественника. Немаловажная роль в этом принадлежит 5'-кэпу. Молекула пре-мРНК обязательно содержит специфические фрагменты последовательности, распознаваемые во время сборки сплайсосомы. Это 5'-конец, последовательность точки ветвления, полипиримидиновый участок и 3'-конец. Материал, с которым работает сплайсосома – это генетический материал, заключенный в молекулах РНК. РНК содержит закодированные инструкции для производства белков, которые нужны организму для строительства и восстановления тканей, регуляции процессов метаболизма, а также большое количество участков, называемых интронами. Задача сплайсосомы состоит в том, чтобы распознать и вырезать интроны. Когда интроныудалены, сплайсосомы могут склеивать экзоны в различных сочетаниях. Благодаря такому перемешиванию и склеиванию экзонов относительно небольшое число генов (чуть больше 20000 в человеческом организме) создает огромное многообразие белков. Этот процесс называется сплайсингом.Альтернативный сплайсинг  представляет собой процесс рекомбинации разныхэкзонов и считается основным источником генетического многообразия у эукариот. Благодаря наличию альтернативных форм сплайсинга геном человека и других организмов содержит относительно небольшое количество генов. У эукариот протеосомы присутствуют в цитозоле и ядрах, но не в других клеточных органеллах. Протеосомы выделяют в виде индивидуальных частиц с коэффициентами седиментации 20S и 26S. Структура протеосомы соответствует выполняемой функции. Каждая протеосома состоит из центрального цилиндрического кора (20S), сложенного из четырех колец, в каждом из которых по 7 белков. Два внешних кольца одинаковые и представлены ‘альфа’ субъединицами, внутренние кольца тоже одинаковые и состоят из ‘бета’ субъединиц. ‘Бета’ субъединицы обладают протеазной активностью. Расщепление белков происходит на внутренней стороне цилиндрического кора. Кор протеосомы на каждом конце связан с регуляторным белком (19S). Эти кэпирующие белки отвечают за распознавание белков, предназначенных для деградации. В процессе, требующем затраты энергии (АТФ), меченые белки теряют третичную структуру и направляются внутрь цилиндра. Там белки расщепляются на пептиды длиной 6-9 аминокислот и высвобождаются наружу. Эти пептиды могут затем использоваться заново. Кэпирующие 19S белки И 20S кор вместе составляют протеосому человека. Протеасомы участвуют в процессинге предшественников с образованием зрелых, активных белков. В частности, процессинг субъединицы p50 транскрипционного фактора NF-kB животных, сопровождающийся отщеплением и деградацией С-концевой части полипептида, происходит с помощью 26S протеасом. В процессе узнавания антигена T-клетками его разрушение до отдельных пептидов осуществляется с помощью  протеасом .  Рибосома — важнейший немембранный органоид живой клетки сферической или слегка эллипсоидной формы, диаметром от 15—20нанометров (прокариоты) до 25—30 нанометров (эукариоты), состоящий из большой и малой субъединиц. Рибосомы служат для биосинтеза белка из аминокислот по заданной матрице на основе генетической информации, предоставляемой матричной РНК, или мРНК. Этот процесс называется трансляцией. В процессе функционирования (т. е. синтеза белка)  рибосомы осуществляет несколько функций:  1) специфическое связывание и удержание компонентов белоксинтезирующей системы [информационная, или матричная, РНК (иРНК): аминоацил-тРНК; пептидил-тРНК; гуанозинтрифосфат (ГТФ); белковые факторы трансляции EF - Т и EF - G]:  2) каталитические функции (образование пептидной связи, гидролиз ГТФ): 3) функции механического перемещения субстратов (иРНК, тРНК), или транслокации. Функции связывания (удержания) компонентов и катализа распределены между двумя рибосомнымисубчастицами. Малая рибосомнаясубчастица содержит участки для связывания иРНК и аминоацил-тРНК и, по-видимому, не несёт каталитических функций. Большая субчастица содержит каталитический участок для синтеза пептидной связи, а также центр, участвующий в гидролизе ГТФ: кроме того, в процессе биосинтеза белка она удерживает на себе растущую цепь белка в виде пептидил-тРНК. 

13. Как бионанообъекты регулируют биологические процессы.

Органические вещества, входящие в состав всех живых представлены в основном аминокислотами, углеводами,липидами  и нуклеиновыми кислотами. Так как эти молекулы имеют важное значение для жизни, метаболические реакции сосредоточены на создании этих молекул при строительстве клеток и тканей или разрушении их с целью использования в качестве источника энергии. Многие важные биохимические реакции объединяются вместе для синтеза ДНК и белков.Углеводы– это органические вещества, к ним относятся моносахариды, олигосахариды и полисахариды. Моносахариды – это простейшие углеводы. В их состав входят углерод, водород и кислород в соотношении 1:2:1. Играют роль промежуточных продуктов реакций, входят в состав нуклеотидов и их производных и некоторых коферментов, служат основными источниками энергии при дыхании, служат исходными веществами для синтеза аминокислот, сложных углеводов и др. ве-в. Олигосахариды –состоят из остатков 2...10 молекул связанных гликозидными связями. Относятся дисахариды. Дисахариды служат источниками энергии в клетках. Полисахариды –состоят из остатков множества моносахаридов (тысячи и десятки тысяч), связанных гликозидными связями. К полисахаридам–гомополимерам относятся: крахмал, гликоген, целлюлоза. Полисахариды запасают (гликоген у грибов и животных, крахмал у растений) и имеют структурные или опорно-защитные функции (целлюлоза, муреин, мукополисахариды). Липиды – это сборная группа органических веществ, которые плохо растворимы в воде, но хорошо растворимы в органических (неполярных) растворителях. В молекулах липидов имеются неполярные (углеводородные) и полярные (–СООН, –ОН, –NH2) участки. К липидам относятся триглицериды, фосфолипиды, стероиды, терпены, воски и некоторые другие вещества. Липид обладают следующими функциями: структурные основа клеточных мембран, запасающие, регуляторные (многие гормоны), защитные, энерготрансформирующие, информационно-сигнальные. Нуклеотиды – это органические вещества, молекулы которых состоят из остатка пентозы (рибозы или дезоксирибозы), к которому ковалентно присоединены остаток фосфорной кислоты и азотистое основание. Свободные нуклеотиды и сходные с ними вещества играют важную роль в обмене веществ. Например, НАД и НАДФ служат переносчиками электронов и протонов. Особенность названных соединений в том, что в окисленной форме они несут единичный положительный заряд, а в ходе восстановления они присоединяют два электрона и один протон. Свободные нуклеотиды способны присоединять еще 1...2 остатка фосфорной кислоты, образуя макроэргические соединения. Универсальным источником энергии в клетке является АТФ – состоящая из аденина, рибозы и трех остатков фосфорной (пирофосфорной) кислоты. Нуклеотиды способны образовывать циклические формы, например, цАМФ, цЦМФ, цГМФ. Циклические нуклеотиды выполняют роль регуляторов различных физиологических процессов. Нуклеиновые кислоты – это линейные неразветвленные гетерополимеры, мономерами которых являются нуклеотиды, связанные фосфодиэфирными связями. Нуклеиновые кислоты обеспечивают хранение, воспроизведение и реализацию генетической (наследственной) информации. ДНК – это нуклеиновая кислота, мономерами которой являются дезоксирибонуклеотиды. ДНК является первичным носителем наследственной информации. В эукариотических клетках ДНК существует в виде нуклеопротеиновых комплексов, в состав которых входят белки-гистоны. Репликация (самоудвоение) ДНК – это один из важнейших биологических процессов, обеспечивающих воспроизведение генетической информации. В результате репликации одной молекулы ДНК образуется две новые молекулы, которые являются точной копией исходной молекулы – матрицы. Каждая новая молекула состоит из двух цепей – одной из родительских и одной из сестринских. Такой механизм репликации ДНК называется полуконсервативным. РНК – это нуклеиновая кислота,  мономерами которой являются рибонуклеотиды. В пределах одной молекулы РНК имеется несколько участков, которые комплементарны друг другу. Между такими комплементарными участками образуются водородные связи. В результате в одной молекуле РНК чередуются двуспиральные и односпиральные структуры, и общая конформация молекулы напоминает клеверный лист на черешке. Белки (протеины, полипептиды) – это линейные гетерополимеры, мономерами которых являются аминокислоты, связанные между собой пептидными связями. Некоторые белки являются ферментами и катализируют химические реакции. Другие белки выполняют структурную или механическую функцию (например, образуют цитоскелет).[6] Белки также играют важную роль в передаче сигнала в клетках, иммунных реакциях, агрегации клеток, активном транспорте через мембраны и регуляции клеточного цикла. Ферменты, или энзимы – это биологические катализаторы. Ферменты снижают энергию активации в биохимических реакциях. Это приводит к тому, что скорость реакций возрастает в миллионы раз. Более того, многие реакции вообще не могут протекать без ферментов. Если реакции обратимы, то ферменты (как и все катализаторы) катализируют как прямую, так и обратную реакции. После завершения реакции ферменты возвращаются в исходное состояние.

14. Основные бионанообъекты, используемые для бионанотехнологий.

Нанообъекты, биологические - наноразмерные биологические объекты— компоненты живых систем, имеющие линейные размеры 1–100 нм по крайней мере в одном измерении. К биологическим нанообъектам относятся молекулы белков, нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) и полисахаридов, формирующие внутриклеточный каркас (цитоскелет) ивнеклеточный матрикс, мембранные каналы, рецепторы и переносчики, систему внутриклеточной сигнализации, молекулярные машины для синтеза, упаковки и утилизации белков и нуклеиновых кислот, производства энергии, внутриклеточного транспорта и движения клеток, ферменты, антитела, антигены и др. Размер белковых молекул и надмолекулярных белковых комплексов колеблется от 1 до 1000 нм. Диаметр спирали ДНК составляет 2 нм, а ее длина может достигать нескольких сантиметров. Белковые комплексы, формирующие нити цитоскелета, имеют толщину 7–25 нм при длине до нескольких микрон. Белковые комплексы, образующие поры, достигают 120 нм в диаметре. Внеклеточные структуры также могут иметь наноразмерные характеристики. Так, экзосомы, везикулы, переносящие материал между клетками, имеют диаметр 65–100 нм, а частицы липопротеинов плазмы крови, транспортирующие липиды в организме, — 8–50 нм (см. рис.). Единственной наноразмерной формой существования живой материи являются вирусы. Их размеры находятся в диапазоне 25–300 нм. Биология и нанотехнологии имеют обширный «интерфейс». Как следует из вышеперечисленного, биологические системы состоят из наноразмерных строительных блоков и молекулярных машин (моторов). Их организация и принципы работы представляют непочатый край новых подходов и структур для нанотехнологий. Вместе с тем, нанотехнологии обеспечивают биологию инструментарием и технологиями для изучения организации живого на молекулярном уровне. Соразмерность биологических структур и искуственныхнаноматериалов, с одной стороны, может определять биологические и токсические свойства последних. С другой — биологические структуры могут использоваться для конструирования новыхнаноустройств. Липопротеины плазмы крови — это один из примеров нанообъектов. Хиломикроны — 1 мкм, ЛПОНП — липопротеины очень низкой плотности — 30–50 нм, ЛППП — липопротеины промежуточной плотности — 40 нм, ЛПНП — липопротеины низкой плотности — 17–25 нм, ЛПВП — липопротеины высокой плотности — 8–12 нм. ДНК, РНК, белки и другие биомолекулы в природе участвуют в переносе заряда и имеют нанометровый размер. Молекула ДНК обладает важными для создания электронных устройств свойствами: самовоспроизводимостью, возможностью копирования и самосборки. Биологические молекулы могут обладать диэлектрическими, металлическими, полупроводниковыми и даже сверхпроводящими свойствами. Принципиальная особенность нанообъектов: Наноразмерность; Особенные свойства; Появилась возможность манипулировать наноразмерными объектами и в перспективе, на молекулярном уровне; Они способны легко преодолевать биологические барьеры организма человека, изменять физиологические и биохимические механизмы и вызывать различные патологии; Высокая биодеградируемость. Главная опасность нанообъектовобусловлена тем, что они могут проникать в организм человека всеми доступными маршрутами: через дыхательные органы (адсорбируясь на огромной поверхности легких, легко всасываться в кровь, минуя печень как очистительный барьер); через органы пищеварения; через кожу (в особенности поврежденную).
15. Использование регуляторов биологических процессов в бионанотехнологии. Регуляторными молекуламибиопроцессов являются гормоны, ферменты, медиаторы, разнообразные биологически активные вещества. Ферменты — это белки, обладающие специфическими каталитическими свойствами, то есть каждый фермент катализирует одну или несколько сходных реакций. Ферменты катализируют реакции расщепления сложных молекул (катаболизм) и их синтеза (анаболизм), в том числе репликацию и репарацию ДНК и матричный синтез РНК.  Гормоны — биологически активные вещества органической природы, вырабатывающиеся в специализированных клетках желёз внутренней секреции, поступающие в кровь и оказывающие регулирующее влияние на обмен веществ и физиологические функции. Гормоны служат гуморальными регуляторами определённых процессов в различных органах и системах.  Медиатор — 1) мультибелковый комплекс, необходимый для транскрипции генов эукариот РНК-полимеразой II. Термин «М.» предложен И. Келлихером с соавт. в 1990 г. 2) сигнальное вещество, синтезирующееся в отличие от гормонов не специализированными клетками желез внутренней секреции, а различными другими типами клеток. После секреции М. оказывает гормоноподобное действие на окружающие ткани. К наиболее важным М. относятся гистамин и простагландины.  Примером регуляторов в биологических системах может стать инактивациянаноматериалов как токсикантов. Первый фермент в мультиферментных системах биотрасформации является обычно регулятором. Поскольку аллостерические ферменты часто участвуют в регулировании (регуляторные ферменты), роль сигнала управления (α) играет эффектор (положительный – активатор, отрицательный – ингибитор). Природные пептидные биорегуляторы — комплексы из пептидов, аминокислот, витаминов и микроэлементов, регулирующих процессы метаболизма. Способствуют: Восстановлению нарушенных функций органов и тканей; Регуляции активности генов: короткие пептиды связываются со строго определенными участками соответствующих генов, инициируя раскручивание молекулы ДНК и считывание с нее информации; Делению клетки без атипии.
16. Основные биологические процессы, используемые в бионанотехнологии.

Процессы, в которые вовлекаются наноструктуры (наночастицы) получили название нанопроцессов. Самый главный нанопроцесс в живом организме – биосинтез белка. Транскрипция – процесс синтеза РНК с использованием комплементарной ей ДНК в качестве матрицы, происходящий во всех живых клетках; перенос генетической информации с ДНК на РНК. Первая стадия процесса биосинтеза белков. Трансляция – осуществляемый рибосомой синтез белка из аминокислот на матрице информационной РНК. Трансляция является финальной реакцией реализации генетической информации.



Каталог: uploads
uploads -> Методические рекомендации организация деятельности по резервам финансовых и материальных ресурсов для ликвидации чрезвычайных ситуаций
uploads -> Кардиоренальные взаимоотношения и качество жизни при лечении больных хронической сердечной недостаточностью с сопутствующим сахарным диабетом 2 типа 14. 00. 06 Кардиология
uploads -> Сердечная недостаточность (книги и статьи из научно-медицинских журналов, имеющихся в фонде библиотеки)
uploads -> Хроническая сердечная недостаточность: определение, классификация, диагностика
uploads -> Лечение гериатрических пациентов с заболеваниями органов дыхания и кровообращения


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница