Экстрапинеальный мелатонин в процессе старения 14. 00. 53 геронтология и гериатрия


Пинеалэктомия как модель старения



страница3/5
Дата23.04.2016
Размер0.61 Mb.
ТипАвтореферат
1   2   3   4   5

Пинеалэктомия как модель старения

У животных контрольной группы при окраске гематоксилином-эозином поверхность слизистой оболочки желудка в пилорическом и фундальном отделах образует ямки, которые выстланы цилиндрическим эпителием и имеют однородный вид, отличаясь глубиной в различных отделах. Железы, располагающиеся в различных отделах, также имеют особенности.


В пилорическом отделе – желудочные ямки значительно глубже, а железы, связанные с ними, более короткие, чем в фундальном отделе.

Помимо эпителиоцитов в исследуемых отделах желудка при окраске по методу Гримелиуса обнаруживаются эндокринные клетки (апудоциты). Они имеют неправильную форму и располагаются в нижних отделах пилорических


и фундальных желез. Обращает внимание явное преобладание апудоцитов
в фундальном отделе по сравнению с пилорическим.

Морфометрический анализ показал, что общее число апудоцитов на 1 мм2 слизистой оболочки фундального отдела желудка более чем на 20% превышает их содержание в пилорическом отделе (14815 и 12012 клеток в


1 мм2 соответственно). При иммуногистохимическом исследовании установлено, что МТ-продуцирующие клетки, составляющие основную массу апудоцитов, локализуются преимущественно в пилорическом отделе желудка, где их количество составляет 26223 на 1мм2.

При моделировании старения (через один месяц после пинеалэктомии) при светооптическом исследовании изменений гистологического рисунка пилорического и фундального отделов желудка на препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, не обнаруживается. В то же время, количественный анализ позволил выявить значительные изменения в количестве апудоцитов слизистой оболочки желудка по сравнению с интактными крысами.

Так, плотность распределения эндокринных клеток в 1 мм2 слизистой оболочки в пилорическом и фундальном отделах возрастает более чем на 50%, достоверно отличаясь от контроля. Аналогичные изменения обнаружены и при морфометрии МТ-иммунопозитивных клеток в желудке, где после пинеалэктомии данный показатель возрастает до 32325 клеток на 1 мм2 в пилорическом отделе и до 410±24 клеток на 1 мм2 в фундальном отделе. Поскольку пинеалэктомия – наиболее адекватная модель нормального процесса старения, такую динамику следует признать близкой к природной.
Нокаутная долгоживущая линия мышей

Желудок. Общее количество нейроэндокринных клеток возрастает
с увеличением продолжительности жизни животных (60442 в 4, 70553 в 21 и 75353 в 34 мес. жизни). Подобная тенденция наблюдается и со стороны ЕС-клеток: количество серотонин/МТ-содержащих ЕС-клеток составляло 32552 в 4, 34549 в 21 и 38946 в 34 мес.

Двенадцатиперстная кишка. Общее количество нейроэндокринных клеток здесь (как и в желудке) возрастает с увеличением продолжительности жизни животных (19614 в 4, 31114 в 21 и 30311 в 34 мес.), хотя к 34-му месяцу отмечается тенденция к снижению количества ЕС-клеток по сравнению с 21 месяцем жизни. Со стороны ЕС-клеток отмечается выраженная гиперплазия с увеличением возраста: 1867 в 4, 37221 в 21 и 43122 в 34 мес. При этом пролиферативная активность эпителиоцитов с возрастом практически не изменяется (PCNA индекс составлял 15,70,7% в 4, 15,70,8% в 21 и 17,61,1% в 34 мес.). Напротив, индекс апоптоза с возрастом увеличивался (от 0,48±0,02% в 4 до 0,85±0,03% в 34 мес.).

Таким образом, проведенные исследования показали неодинаковую реакцию гастроинтестинальных МТ-продуцирующих клеток в различных моделях старения. При радиационном старении отмечалась выраженная гипоплазия МТ-иммунореактивных клеток в двенадцатиперстной кишке и особенно остро реагировала популяция тучных клеток, численность которых в опытной группе снижалась по сравнению с контрольной почти в 10 раз. В то же время при пинеалэктомии и в нокаутной долгоживущей линии мышей популяция ЕС-клеток достоверно возрастала. Такое разночтение результатов, по-видимому, объясняется менее физиологичным (более жестким) действием радиации на пул стволовых клеток желудочно-кишечного тракта, чем влияние пинеалэктомии, которая более мягко (приближенно к реальности) моделирует процессы старения.


Экстрапинеальный мелатонин при различных заболеваниях

в пожилом и старческом возрасте
Мелатонин-содержащие клетки слизистой оболочки при патологии

желудочно-кишечного тракта в пожилом и старческом возрасте
Гастрит и язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки.

С целью выяснения участия МТ-содержащих ЕС-клеток слизистой оболочки желудка в процессе старения проведено изучение функциональной морфологии слизистых оболочек желудка и двенадцатиперстной кишки у пожилых и старых людей в норме, при язвенной болезни и гастрите.



Контрольная группа. ЕС-клетки обычно имеют веретеновидную, неправильную или треугольную форму с длинным апикальным отростком, обеспечивающим контакт ЕС-клеток с их микроокружением. ЕС-клетки, кроме аргирофильных свойств, присущих всем другим апудоцитам, обладают также аргентаффинными свойствами. При иммуногистохимическом исследовании большинство из них вступают в положительные реакции с антителами к серотонину и МТ, однако часть клеток обнаруживает иммунопозитивные свойства только к какому-либо одному гормону – серотонину или МТ. Среднее количество ЕС-клеток на 1 мм2 слизистой оболочки в норме составляет 200,5±17,1 (для серотонин-содержащих) и 130,6±14,0 (для МТ-содержащих).

При электронно-микроскопическом исследовании ЕС-клетки имеют крупное овальное ядро с хорошо выраженным хроматином и ядрышком. В их цитоплазме обнаруживаются хорошо развитый ШЭР и гладкий эндоплазматический ретикулум (ГЭР), митохондрии, рибосомы, пластинчатый комплекс с признаками различной функциональной активности, лизосомы, вакуоли.

Основным отличительным признаком ЕС-клеток служит присутствие в их цитоплазме многочисленных нейроэндокринных секреторных гранул, которые являются местом окончательного образования и хранения МТ, серотонина и пеп­тидных гормонов (мотилина, вещества Р). При электронно-микроскопическом исследовании в цитоплазме ЕС-клеток выявляются полиморфные, округлые, ган­телеобразные и ракетообразные гранулы с сердцевиной различной электронной плотности.

Хронический гастрит. У больных хроническим гастритом отмечается утолщение слизистой оболочки. В эпителии обнаруживаются дистрофические изменения различной степени выраженности. Границы между эпителиоцитами не всегда четко контурируются. Собственный слой слизистой оболочки отечен, инфильтрирован лимфоцитами и плазматическими клетками. Изменение количества ЕС-клеток обнаруживало тенденции к гиперплазии, содержание их на 1 мм2 слизистой оболочки было следующим: серотонин-содержащие – 250,6±17,1 и МТ-содержащие – 190,6±14,5.

У больных с атрофическим гастритом отмечается истончение слизистой оболочки. Желудочные ямки удлиняются, а железы укорачиваются. Кровеносные капилляры расширены, наблюдается стаз крови, иногда мелкие кровоизлияния. Выражена полиморфноклеточная инфильтрация с преобладанием лимфоцитов и плазматических клеток.

При анализе количества ЕС-клеток установлено, что их количество имеет тенденцию к увеличению и составляет 280,6±19,4 (серотонин-содержащие) и 200,2±11,2 (МТ-содержащие). Гранулы в них в основном концентрируются вблизи клеточной мембраны. В некоторых секреторных гранулах снижается электронная плотность.

Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Функциональная морфология и количество ЕС-клеток желудка в период ремиссии язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки практически не отличались от контроля или от их состояния при гастрите (если таковой имелся, а в преобладающем большинстве случаев он имел место). Существенные отличия были обнаружены у больных в период обострения заболевания, что дает основание считать значимыми выявление и анализ их как прогностических маркеров течения патологического процесса.

Язвенная болезнь желудка (обострение). У больных язвенной болезнью желудка в период обострения по краю язвы выявляются зоны фибриноидного некроза. Выражена клеточная инфильтрация с преобладанием нейтрофилов и эозинофилов. Со стороны ЕС-клеток отмечалась гиперплазия – 380,6±13,4 (серотонин-содержащие) и 290,2±12,7 (МТ-содержащие).

Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (обострение). При обострении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки общее число аргирофильных клеток в антральном отделе желудка еще более увеличивается. При этом отмечается выраженная гиперплазия ЕС-клеток: 440,5±14,2 (серотонин-содержащие) и 350,3±13,7 (МТ-содержащие).

Количество ЕС-клеток при патологии желудка и двенадцатиперстной кишки в пожилом и старческом возрасте представлено в табл. 4.



Таблица 4

Количество ЕС-клеток в слизистой оболочке при патологии желудка
в пожилом и старческом возрасте (на 1 мм
2)

Группа больных

ЕС-клетки

(серотонин)



ЕС-клетки

(МТ)


Контроль

200,5±17,1

130,6±14,0

Поверхностный гастрит

250,6±15,2 *

190,6±14,5 *

Атрофический гастрит

280,6±19,4*

200,2±11,2*

Язвенная болезнь желудка (обострение)

380,6±13,4*

290,2±12,7*

Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (обострение)

440,5±14,2*

350,3±13,7*

Примечание: *- р<0,05 по сравнению с контрольными значениями.
При электронно-микроскопическом исследовании со стороны ЕС-клеток при язвенной болезни, как желудка, так и двенадцатиперстной кишки, отмечалось их различное функциональное состояние. Часть клеток была перенасыщена гранулами, в других клетках цитоплазма была опустошенной с резко выраженными профилями эндоплазматического ретикулума. Часть гранул сохраняла высокую электронную плотность, другая часть ее теряла. Нередко отмечался эндоцитоз гранул через клеточную мембрану.
Хронический колит и рак толстой кишки

Для объективной и унифицированной оценки роли и участия ЕС-клеток


в патогенезе хронических колитов и рака толстой кишки проведено изучение их функциональной морфологии и количества в слизистой оболочке сигмовидного отдела толстой кишки, так как именно в нем располагается наибольшее количество эндокринных клеток.

Контрольная группа. Однослойный цилиндрический эпителий слизистой оболочки интактной сигмовидной кишки состоит из каемчатых или бескаемчатых призматических энтероцитов, бокаловидных клеток и отдельных эндокринных клеток (апудоцитов). Каемчатые призматические (всасывательные) энтероциты – наиболее многочисленные клетки кишечного эпителия (составляют около 90% общего числа клеток кишечного эпителия в сигмовидной кишке). Характерной чертой их дифференцировки является образование щеточной каемки из плотно расположенных микроворсинок на апикальной поверхности клеток. Среди каемчатых энтероцитов располагаются бокаловидные клетки, в цитоплазме которых обнаруживается большое количество муцинов – основных компонентов кишечной слизи. Клетки Панета в норме в сигмовидной кишке практически не встречаются.

В слизистой оболочке сигмовидного отдела толстой кишки присутствуют ЕС-клетки, содержащие серотонин и МТ. Среднее количество ЕС-клеток на 1 мм2 слизистой оболочки в норме составляет 20,7±5,0 для серотонин-содержащих клеток и 30,0±2,3 для МТ-содержащих.



Хронический колит (ХК). При ХК наблюдались воспалительные неспецифические изменения различной степени выраженности без образования язвенных дефектов. Патологический процесс носил характер поверхностного или диффузного воспаления. При поверхностном воспалении наблюдался отек слизистой оболочки, увеличение диаметра капилляров, укорочение и расширение крипт, незначительное увеличение количества бокаловидных клеток с повышенным содержанием в них слизи, незначительная очаговая инфильтрация кишечной стенки лимфоцитами, гранулярными лейкоцитами, плазматическими клетками.

Сосуды микроциркуляторного русла были расширены и полнокровны. Среди тучных клеток многие были дегранулированными. При диффузном воспалении слизистой оболочки наблюдалось распространение лимфоплазмоцитарной инфильтрации на всю слизистую оболочку, отмечались уплощение, дистрофия, некроз и слущивание покровного эпителия.

Со стороны ЕС-клеток отмечалось как увеличение аргентаффинных
ЕС-клеток, окрашенных по Массону, так и ЕС-клеток, выявленных при иммуноцитохимических реакциях, соответственно, на серотонин и МТ. Среднее их количество составило для серотонин-иммунопозитивных клеток 80,2±6,1 и для МТ-иммунопозитивных клеток 100,1±8,4 на 1 мм2 слизистой оболочки. При этом также отмечалось увеличение числа секреторных гранул в их цитоплазме с одновременной активизацией рельефа эндоплазматического ретикулума.

Неспецифический язвенный колит (НЯК). НЯК характеризуется геморрагически-гнойным воспалительным процессом различной степени выраженности. В сравнительно «мягких» вариантах отмечается утолщение слизистой оболочки с многочисленными геморрагиями, эрозиями и мелкими изъязвлениями, в то время как при тяжелых процессах наблюдалась гипоплазия слизистой оболочки, вплоть почти до полной ее аплазии. В эпителии обнаруживаются дистрофические изменения различной степени выраженности, часто встречаются язвы, размеры и глубина которых зависят от распространенности некробиотического процесса.

Границы между эпителиоцитами не всегда четко контурируются. Отмечается отек собственной пластинки слизистой оболочки, которая обильно инфильтрирована лимфоцитами, эозинофильными лейкоцитами и плазматическими клетками. Наблюдается гиперплазия бокаловидных клеток с гиперсекрецией слизи, которая на электронно-микроскопическом уровне выражается в большом количестве слизистых вакуолей в цитоплазме бокаловидных клеток.

Часто участки регенерации сочетались с участками фиброза, деформировавшего структуру стенки кишки. При этом отмечалось развитие грубоволокнистой соединительной ткани и образование грануляций в дне язв.
В некоторых случаях при изменениях слизистой оболочки, аналогичным вышеописанным, в участках компенсаторной гиперплазии и аденоматоза слизистой оболочки отмечался атипизм клеток, гиперхромия ядер, разрывы базальной мембраны желез, что формировало разрастания железистого рака.

Во всех случаях НЯК в слизистой оболочке обнаруживались клетки Панета, причем нередко их число значительно превышало обычное количество этих клеток в типичных местах их расположения – криптах тощей и подвздошной кишок.

Количество ЕС-клеток практически не отличалось от такового при хроническом колите. Так, среднее количество серотонин-иммунопозитивных клеток составляло 80,7±7,3, а МТ-иммунопозитивных – 100,8±9,5 на 1 мм2 слизистой оболочки, соответственно. При окраске по Массону также не обнаруживалось различий в количестве ЕС-клеток с таковым при хроническом колите, среднее количество их составляло 60,0±4,5 на 1 мм2 слизистой оболочки. При электронно-микроскопическом исследовании ЕС-клетки демонстрировали различную степень насыщения цитоплазмы секреторными гранулами.

Болезнь Крона (БК) представляет собой неспецифический воспалительный рецидивирующий процесс. Воспаление при БК носит гранулематозный характер. Признаки воспалительного процесса обнаруживались во всех слоях стенки кишки, но в отличие от НЯК, в слизистой оболочке они были менее выражены. Эпителиоциты были уплощены, иногда отмечались аплазированые участки слизистой оболочки (в зоне язв щелевидной формы, поверхность которых была покрыта фибрином). В воспалительном инфильтрате преобладали лимфоциты, скопления которых формировали гранулематозные саркоидоподобные образования, но без гигантских клеток Пирогова-Лангганса. Такие гранулемы выявлялись преимущественно в периваскулярной и периневральной соединительной ткани во всех слоях кишечной стенки.

При анализе количества ЕС-клеток установлено, что число аргентаффинных ЕС-клеток, окрашенных по методу Массона, хотя и увеличивается по сравнению с контролем (70,4±6,0 на 1 мм2 слизистой оболочки), но достоверно не отличается от их количества при хроническом и неспецифическом язвенном колите. При этом отмечается переход секреторных гранул в ЕС-клетках из базальной части в длинный отросток – «антенну», который в ряде случаев достигает просвета крипт.



Рак толстой и прямой кишки (РТПК). Все исследуемые опухоли представляли собой РТПК. В подавляющем большинстве гистологически верифицировалась аденокарцинома различной степени дифференцировки.
Для изучения количества эндокринных клеток при опухолевом процессе исследовали интактную слизистую оболочку сигмовидной кишки вне расположения опухоли.

Количество аргентаффинных ЕС-клеток, окрашенных по методу Массона, снижалось в 2 раза по сравнению с контролем (10,8±1,2 на 1 мм2 слизистой обо­лочки). При использовании иммуноцитохимического метода и последующей морфометрии обнаружено, что среднее количество серотонин-иммунопозитив­ных ЕС-клеток составляет 10,0±1,2, а МТ-иммунопозитивных ЕС-клеток – 10,7±1,3 на 1 мм2 слизистой оболочки, то есть снижается по сравнению с кон­трольными показателями почти в 3 раза. При электронно-микроскопическом ис­следовании обнаруживается большое количество ЕС-клеток с дегрануляцией и отмечается более частый выход отдельных гранул путем экзоцитоза в межкле­точное пространство.

Количество ЕС-клеток в слизистой оболочке при патологии толстой кишки в пожилом и старческом возрасте отражены в табл. 5.
Таблица 5

Количество ЕС-клеток в слизистой оболочке при патологии
толстой кишки в пожилом и старческом возрасте


Группа больных

Метод Массона

Серотонин

МТ

Контроль

20,2±4,2

20,7±5,0

30,0±2,3

Хр. колит

60,3±4,2*

80,2±6,1*

100,1±8,4*

Несп. язв. колит

60,0±4,5*

80,7±7,3*

100,8±9,5*

Б-нь Крона

70,4±6,0*

10,7±1,7*

110,9±1,4*

Рак толстой кишки

10,8±1,2

10,0±1,2*

10,7±1,3*

Примечание: количество клеток содержащихся в 1 мм2 среза.

*- р<0,05 по сравнению с контрольными значениями.


Мелатонин-содержащие клетки предстательной железы при опухолях, ассоциированных с возрастным изменением функции простаты
Доброкачественная гиперплазия предстательной железы

При микроскопическом исследовании предстательной железы большей частью узлы имеют аденоматозную структуру. Они построены из тесно расположенных ветвистых желез причудливой формы, образующих многочисленные крипты и сосочковые выросты. Железы выстланы 1-2 слоями клеток высокого призматического эпителия, в области сосочков количество слоев увеличивается.

Цитоплазма эпителиальных клеток светлая, слегка зернистая, в апикальных отделах выявляются жировые включения. Ядра гиперхромные, округлой формы располагаются преимущественно в базальных отделах клеток.

Самые большие узлы иногда достигали в диаметре 5-6 см, состояли из многочисленных кист довольно крупного размера, разделенных тонкими фиброзными, нередко гиалинизированными прослойками, иногда содержащими пучки гладких мышц. Перегородки между кистами нередко разрушаются и тогда образуются крупные гроздевидные кистозные конгломераты, в просвет которых выступают остатки перегородок в виде фиброзных выступов с булавовидным утолщением на конце.

Кисты выстланы однорядным высоким цилиндрическим, кубическим или плоским эпителием, иногда обнаруживаются единичные сосочковые образования. В просвете кист гомогенное содержимое, окрашивающееся эозином в бледно-розовый цвет. Иногда наблюдается множество мелких амилоидных телец.

Значительно реже встречаются «фиброзно-аденоматозные» узлы, построен­ные из немногочисленных редко разбросанных трубочек, выстланных кубиче­ским или низкопризматическим эпителием с хорошо очерченными границами, слабо заметной цитоплазмой и довольно крупным ядром. В просвете железистых трубочек находится секрет ярко-розового цвета.

При иммуногистохимическом исследовании в ткани ДГПЖ обнаруживалось довольно большое количество нейроэндокринных клеток, накапливающих МТ и его основной предшественник – серотонин.

Площадь МТ-содержащих клеток в ДГПЖ ниже, чем в контрольной группе у больных того же возраста и составляет 4,34±0,01% у 50-59-летних пациентов, что в 2 раза больше, чем у пациентов 60-69 лет, а для серотонина она была равна 4,36% в группе 50-59 лет (p<0,05). С увеличением возраста площадь серотонин-содержащих клеток увеличивается, особенно у пациентов с ДГПЖ в возрасте 70 лет и старше (5,33±0,02%).

У пациентов 50-59 лет оптическая плотность МТ-содержащих клеток достигает максимального значения (0,35±0,02 у.е.), а серотонина (0,38±0,01 у.е.). С увеличением возраста пациентов наблюдается достоверное снижение оптической плотности МТ, а плотность серотонина увеличивается (p<0,05). Площадь МТ- и серотонин-позитивных клеток при ДГПЖ была достоверно выше, чем у людей контрольной группы.
Рак предстательной железы

Все исследуемые случаи рака предстательной железы были гистологически представлены аденокарциномой, характеризующейся клеточным полиморфизмом и различной степенью дифференцировки опухолевых клеток. Площадь накопления МТ в раковых опухолях достоверно снижалась с увеличением возраста (p<0,05). Для серотонина отмечается тенденция к значительному увеличению показателей (2,33±0,02%). У пациентов величина площади МТ-содержащих клеток составила 3,34±0,01%, в группе 60-69 лет она была равна 3,28±0,02%, а для серотонина – 2,02±0,01%.

Оптическая плотность МТ-позитивных клеток достигает максимального значения у больных 50-59 лет (0,35±0,01 у.е.), обратная тенденция наблюдается при анализе плотности серотонин-позитивных клеток (0,43±0,02 у.е.).

Во всех аденокарциномах были обнаружены серотонин- и МТ-содержащие нейроэндокринные клетки. При окраске гематоксилином-эозином они были крупнее обычных клеток, цитоплазма их была эозинофильна, ядро смещено в апикальный полюс.

Обширные и множественные скопления нейроэндокринных клеток в основном обнаруживались в высокодифференцированных опухолях. При этом опухолевые нейроэндокринные клетки не демонстрировали признаков пролиферативной активности.

При иммуногистохимическом исследовании раковых опухолей предстательной железы с использованием специфических антисывороток к МТ было обнаружено, что в 20 из 32 случаев аденокарциномы часть клеток, в которых была зарегистрирована положительная реакция с антисывороткой к серотонину, вступала в положительную реакцию с антисыворотками к МТ.

Проведенные иммуногистохимические исследования показали, что в раковых опухолях предстательной железы содержатся нейроэндокринные клетки, ответственные за продукцию серотонина и МТ.


Каталог: common -> img -> uploaded -> files -> vak -> announcements -> medicin
medicin -> Тревожно-депрессивные расстройства и качество жизни у больных старческого возраста c ишемической болезнью сердца, осложненной хронической сердечной недостаточностью, возможности коррекции 14. 00. 05 внутренние болезни
medicin -> Внутриполостная фотодинамическая терапия рака мочевого пузыря и аденомы предстательной железы 14. 00. 40. Урология
medicin -> Научное обоснование совершенствования организации, планирования и финансирования амбулаторно-поликлинической помощи в крупном городе 14. 00. 33 общественное здоровье и здравоохранение
medicin -> Преимущество антиоксидантов над ингибиторами протеаз в лечении острого панкреатита и профилактике его осложнений (Экспериментально-клиническое исследование) 14. 00. 27 хирургия
medicin -> Роль медико-социальных факторов в формировании здоровья детей подросткового возраста и пути совершенствования профилактической помощи 14. 00. 33 «Общественное здоровье и здравоохранение» 14. 00. 09
medicin -> Ожирение и реваскуляризация миокарда: факторы риска, диагностические особенности, непосредственные и отдаленные результаты хирургического лечения. Кардиология 14. 00. 06
medicin -> Научное обоснование и разработка региональной модели организации борьбы с туберкулезом в современных социально-экономических и эпидемиологических условиях 14. 00. 33 Общественное здоровье и здравоохранение
medicin -> Терапевтическая эффективность и особенности действия препаратов интерферона и индукторов интерферона при вариантах течения вирусных урогенитальных инфекций 14. 00. 25 фармакология, клиническая фармакология 14
medicin -> Пути улучшения результатов лечения стенозирующих доброкачественных заболеваний пищевода 14. 00. 27. хирургия
medicin -> Изучение иммунореактивности при хронической сердечной недостаточности различной этиологии и возможности иммунокоррекции статинами 14. 00. 06 -кардиология 14. 00. 36 Аллергология и иммунология


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница