Методические разработки к практическим занятиям по иммунологии для студентов лечебного и педиатрического факультетов



Скачать 245.87 Kb.
страница1/6
Дата23.04.2016
Размер245.87 Kb.
ТипМетодические разработки
  1   2   3   4   5   6
Министерство образования и науки РФ

ГБОУ ВПО «Дагестанская государственная медицинская академия» МЗ РФ

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии

Методические разработки к практическим занятиям по иммунологии для студентов лечебного и педиатрического факультетов

Махачкала 2013
Составители: Саидов М.С. – зав.кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии, к.м.н., доцент; д.б.н., проф. Омарова С.М., к.м.н., доценты - Царуева Т.В.,Гаджиева А.Д., к.м.н., ассистенты Алиева А.И., Саидова Б.М., Исаева Р.И.

Рецензент: зав. кафедрой патологической физиологии д.м.н., профессор Саидов М.З.

Пособие рекомендовано ЦК МС ДГМА для использования в учебном процессе (протокол №_____ от «___»_________________2013г.)



Занятие № 1
Тема: Иммунитет. Виды иммунитета. Врожденный иммунитет. Клеточные факторы. Фагоцитоз.

Цель занятия: Изучить виды иммунитета, механизмы и факторы неспецифической резистентности.

Вопросы обсуждения:

  1. Современное понятие иммунитета.

  2. Виды иммунитета.

  3. Врожденный иммунитет(неспецифическая резистентность). Факторы.

  4. Клеточные факторы врожденногоиммунитетаНР.

  5. Фагоцитоз. Стадии фагоцитоза.

  6. Незавершенный фагоцитоз.

  7. Фагоцитарная активность, фагоцитарное число их определение.

  8. Естественные киллеры, их функция в организме.

Самостоятельная работа студентов:

  1. Составить таблицу – «Виды иммунитета»

  2. Определение фагоцитарной активности в готовых препаратах (подсчет фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя)

  3. Изучить незавершенный фагоцитоз по готовым препаратам.

Методические указания к самостоятельной работе:

Определение фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя invitro



Техника постановки: в небольшую пробирку наливают последовательно микропипеткой 0,05мл 2% р-ра цитрата натрия, 0,1мл испытуемой крови и 0,05мл 2-миллиардной взвеси S. Aureus (штамм 209). Тщательно перемешивают и выдерживают 30мин. При 37ºС. После этого содержимое пробирки вновь перемешивают и готовят из него тонкие мазки, которые фиксируют метанолом или смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течении 20 – 30 минут.

Препараты микроскопируют, передвигая мазок в одном направлении, подсчитывают число фагоцитированных бактерий в 50 лейкоцитах. Исходя из этого определяют среднее количество фагоцитированных бактерий на один лейкоцит.

Изучение незавершенного фагоцитоза в препаратах из отделяемого уретры больного гонореей. Результаты записать в тетрадь.

Мазки фиксируют на пламени горелки и окрашивают по Грамму (или метиленовой синькой). При микроскопии мазков отмечают наличие грамотрицательных диплококков, расположенных внутри фагоцитов (лейкоцитов). Зарисовать в тетради.



Расчет показателей фагоцитоза

  1. Процент фагоцитирующих нейтрофилов (% фагоцитоза) – считают процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего количества посчитанных нейтрофилов. В норме процент фагоцитоза у взрослых -60-90%, у детей – 30-65%.

  2. Фагоцитарное число – это среднее количество поглощенных бактерий или частиц на 1 клетку (полиморфно – ядерный лейкоцит).

В норме фагоцитарное число после 30 мин инкубации составляет 4,5- 7,5.

  1. Показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) - оценивают переваривающую функцию нейтрофилов. Это отношение количества переваренных микробов к общему числу поглощенных микробов (переваренных и непереваренных), выраженное в процентах. Норма для взрослых - 64 – 72%.

  2. Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ). В норме через 30 мин начинается переваривание поглощенных микроорганизмов нейтрофилами, через 2 ч. оно должно закончиться. Поэтому процент фагоцитирующих нейтрофилов и среднее число поглощенных микроорганизмов после 2-часовой экспозиции меньше, чем после 30 – минутной, а ИЗФ - больше 1,0, что указывает на завершенность фагоцитоза. ИЗФ меньше 1, 0 свидетельствует о сниженной киллерной функции нейтрофилов.

ИЗФ – среднее число поглощенных микроорганизмов через 30 мин/ среднее число поглощенных микроорганизмов через 120 мин.
Занятие № 2.
Тема: Врожденный иммунитет. Клеточные и гуморальные факторы неспецифической резистентности организма.

Цель занятия: Изучить клеточные и гуморальные факторы неспецифической резистентности организма.

Вопросы обсуждения:

  1. Врожденный иммунитет. Внешние и внутренние барьеры неспецифической резистентности организма.

  2. Клеточные и гуморальные факторы врожденного иммунитета.

  3. Что такое лизоцим? Методика определения лизоцима в слюне

  4. Комплемент, пути активации комплемента.

  5. Интерферон, острофазные белки сыворотки крови.

  6. Воспаление, признаки воспаления.

Самостоятельная работа студентов:

  1. Определить титр лизоцима в слюне по демонстрационному материалу

  2. Разобрать схему классического и альтернативного путей активации комплемента. (табл.)

  3. Поставить опыт по определению бактерицидного действия кожи

  4. Изучить комплементарную активность сыворотки крови по демонстрационному материалу.

Методические указания к самостоятельной работе

  1. Определение титра лизоцима в слюне

Лизоцим представляет собой термостабильный белок типа муколитического фермента. Он содержится в тканевых жидкостях животных и человека –в слезах, слюне, перитонеальной жидкости, плазме, сыворотке крови, лейкоцитах, материнском молоке и др.

Лизоцим продуцируется моноцитами крови и тканевыми макрофагами. Он вызывает лизис бактерий, но не активен в отношении вирусов.

Для определения титра готовят ряд последовательных разведений слюны в пробирках, в каждую из которых вносят по 1 мл. суспензии суточной культуры Micrococcuslisodecticus, содержащей 1 млрд/мл микробных тел.

(табл)


Протокол определения действия лизоцима слюны на

Micrococcuslisodecticus


Титр
Ингредиенты

1:2

1:4

1:8

1:16

Кс

Кф

Кк

1

2

3

4

5

6

7

Слюна

1,0










1,0

_

_

Физ. раствор

1,0

1,0

1,0

1,0

_

1,0

_

Взвесь суточной культуры

Mlisodecticus




1,0

1,0

1,0

1,0

_

_

1,0

Примечание: Из 4- пробирки 1,0 мл вылить в банку с дезраствором.

После инкубации в термостате в течение 3 ч определяют титр лизоцима по последнему разведению, в котором наблюдается полный лизис бактерий – просветление. Более точную оценку активности лизоцима можнопроводить, измеряя спектрофотометрическим методом изменение оптической плотности микробной взвеси после инкубации ее с разведениями лизоцима. Пользуясь калибровочными кривыми или специальными таблицами, активность лизоцима можно выразить в мкг/мл. Уровень содержания лизоцима в слюне здоровых людей колеблется от 50 до 70 мкг/мл.


  1. Определение бактерицидного действия кожи

Важным фактором неспецифической резистентности является функция кожи как механического барьера для внедрения паразита. Отторжение верхних слоев эпидермиса, секреты сальных и потовых желез способствуют их удалению с поверхности кожи. Существенную роль в элиминации микробов с поверхности кожи играют различные микробоцидные субстанции (молочные и жирные кислоты и др.), обеспечивающие ее «самоочищение». Поэтому различные микроорганизмы, не являющиеся ее постоянными обитателями, не могут в течение продолжительного времени сохраняться на коже. Бактерицидность кожных секретов зависит от их кислотности.
Для определения бактерицидной активности кожи суточную бульонную культуру кишечной палочки (1:50000) наносят на внутреннюю поверхность предплечья и распределяют равномерно шпателем. Делают отпечаток на предметное стекло со средой Эндо с одного участка исследуемой кожи, а через 15 минут - со смежного. Инкубируют посевы 18-24 часа при 37°С и подсчитывают колонии на 3 см2 поверхности каждой пластины.

Индекс бактерицидности (ИБ) вычисляют по формуле:


ИБ=К1-К2х100

К1
где K l - количество колоний сразу после нанесения на кожу, К 2 - количество колоний через 15 минут после контакта.

У здоровых людей ИБ равен 90-100%


  1. Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК)

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) является показателем естественной способности крови к самоочищению. В 1886 г. Высокович обнаружил, что различные бактерии, введенные в кровь кроликов и собак, не удаляются из организма выделительными органами, если эти микробы не повреждены. Исчезновение их из организма связано с наличием в сыворотке особых веществ, убивающих и растворяющих микробные клетки. Бактерицидное действие сыворотки крови распространяется как на грамположительные, так и на грамотрицательные бактерии.

Методика:

Из 18-ти часовой культуры кишечной палочки методом серийных разведений готовят рабочую концентрацию до 40-50 тыс. м. т. в 1 мл. Рабочую взвесь тест-микробов в количестве 0,1 мл высевают на чашку Петри с МПА. Шаблоном диаметром 20 мм по поверхности агара с культурой микроорганизмов делают отверстия (в центре и по периферии отмечают контрольные отверстия, на которые не наносится испытуемая сыворотка). На каждую площадку с посевом тест-культуры наносят пипеткой 0,05 мл исследуемой сыворотки. Через 24 часа инкубации в условиях термостата проводят подсчет выросших колоний, как на опытных, так и на контрольных площадках. Бактерицидную активность сыворотки крови рассчитывают по формуле:


БАСК(%) =100х(1- конечное количество жизнеспособных бактерий)

исходное количество бактерий


Нормативное значение - 80 - 90%
Занятие № 3
Тема:Иммунная система. Иммунокомпетентные клетки. Происхождение Т и В лимфоцитов, их функциональное значение в иммунных реакциях.

Цель занятия: Изучить свойства иммунокомпетентных клеток и их взаимосвязь в иммунном ответе. Познакомиться с тестами определения Т и В лимфоцитов.

Вопросы обсуждения:

  1. Центральные и периферические органы иммунитета.

  2. Принцип организации иммунной системы.

  3. Генез (развитие и дифференцировка) лимфоцитов и их значение в формировании клеточного и гуморального иммунитета.

  4. Понятие о предшественниках Т- и В- лимфоцитов.

  5. Сходство и различие Т- и В- лимфоцитов.

  6. Рециркуляция лимфоцитов.

  7. Понятие об иммунном ответе, его формы.

Самостоятельная работа студентов:

1. Изучение препаратов со спонтанным розеткообразованием - определение количества Т-лимфоцитов (определить % Е - РОК)

2. Изучение бласттрансформации лимфоцитов под влиянием ФГА для определения функциональной активности Т-лимфоцитов (определить % бластов).

3. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов.

4. Оформление и защита протокола.

Методические указания к самостоятельной работе

Иммунологические методы диагностики - методы исследования иммунного статуса организма; применяются в педиатрии, акушерстве и гинекологии. Ныне принят двухэтапный метод оценки функционирования иммунной системы. На 1-м этапе выявляются обобщённые характеристики В- и T-систем иммунитета и фагоцитоза. К иммунологическим тестам 1-го уровня относят определение: 1) абсолютного и относительного числа лимфоцитов в периферической крови; 2) абсолютного и относительного числа Т- и В-лимфоцитов в крови; 3) концентрации сывороточных иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA); 4) фагоцитарной активности нейтрофилов.

Сведения об абсолютном и относительном числе лимфоцитов являются интегральным показателем функционирования иммунной системы. Для определения Т-лимфоцитов используют реакцию спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-розеткообразование), В-лимфоцитов - реакцию розеткообразования с эритроцитами барана, несущими на своей поверхности комплекс антитело-комплемент (ЕАС-розеткообразование). Возможно также определение В-лимфоцитов методом спонтанногорозеткообразования с эритроциами мыши. К-во IgM, IgG, IgA чаще всего оценивается методом радиальноиимму-нодиффузии по Манчини. При различных заболеваниях наблюдаются стереотипные колебания уровня Т- и В-лимфоцитов, иммуноглобулинов, которые во многом сходны и лишены специфичности, т. к. связаны не с непосредственным этиологическим фактором, а со стрессовой реакцией организма на болезнь. Динамика уровней иммуноглобулинов, Т- и В-клеток очень важна для выявления больных с иммунологической недостаточностью, определения влияния на иммунную систему тех или иных лекарственных средств.

О функциональной активности Т- и В-лимфоцитов судят по реакции бластной трансформации (РБТЛ) с использованием митогена - фитогемагглютинина (ФГА).

Реакция бласттрансформации характеризует способность лейкоцитов к трансформации и размножению под воздействием антигенов, аллергенов и митогенов.

Пролиферативный ответ лимфоцитов на антигены даёт представление о выраженности специфической сенсибилизации организма.

Реакция бласттрансформации применяется для комплексной оценки иммунного статуса больного.

Метод определения реакции бласттрансформации

Микроскопия.



Нормальные пределы реакции бласттрансформации

Для РБТЛ с ФГА: 50-70%

Для РБТЛ с антигеном: отрицательный

Материал для анализа реакции бласттрансформации

Плазма крови.

Забор крови осуществляется в пробирку с гепарином. Кровь должна быть доставлена в лабораторию в течение 2 часов.

Подготовка пациента к реакции бласттрансформации

Забор крови осуществляют в утренние часы натощак. Накануне исследования и в день забора крови исключить жирную пищу.



Факторы, влияющие на реакцию бласттрансформации

Снижают: цитостатики, иммунодепрессанты, кортикостероиды, облучение ионизирующей радиацией.



Расшифровка анализов

РБТЛ с ФГА

Повышение: гиперактивность иммунной системы при аллергических и аутоаллергических заболеваниях, активация антитрансплантационного иммунитета, острый период первичной инфекции, иммунный ответ на тимусзависимые антигены.

Снижение: онкологические заболевания, вторичные иммунодефициты, первичные иммунодефициты, СПИД, тяжёлые вирусные инфекции, тяжёлые ожоги, травмы.

РБТЛ с антигеном:

Наличие пролиферативного ответа лимфоцитов на определенный антиген даёт представление о наличии и выраженности специфической сенсибилизации организма.


Занятие № 4
Тема: Антигены, их классификация. Главный комплекс гистосовместимости, строение и функция.

Цель занятия: Изучить антигены, их классификацию, центральные и периферические органы иммунной системы.
Вопросы для обсуждения:

1. Антигены, их свойства. Полноценные и неполноценные антигены.

2. Антигенная структура микробов. Протективные антигены. Гетерогенные антигены.

3. Антигены организма человека и животных (опухолевые, аутоантигены, изоантигены, антигены главного комплекса гистосовместимости).

4. Иммунная система организма взрослого и ребенка: организация и функции.

5. Что такое антиген? Дайте определение. Какова химическая природа антигенов.

6.Дайте понятие чужеродности, антигенности, иммуногенности, специфичности антигена.

7. Что такое антигенная детерминанта? Дайте определение валентности антигена.

8. Чем обусловлены особенности химического строения антигенов?

9. Что такое гаптен? Приведите примеры.

10. Укажите виды антигенной специфичности?

11. Назовите изоантигены человека: эритроцитарные, лимфоцитарные, тромбоцитарные.

12. Что такое тимусзависимые и тимуснезависимые антигены? Приведите примеры.

13. Когда возникают аутоантигены? Что это за антигены?Понятие иммунитета. Виды и формы иммунитета.



Самостоятельная работа студентов:

1. Изучение препаратов

2. Микроскопия и зарисовка демонстрационных препаратов.

3. Оформление и защита протокола.



Методические указания к самостоятельной работе

Антигены – это высокомолекулярные соединения. При попадании в организм вызывают иммунную реакцию и взаимодействуют с продуктами этой реакции: антителами и активированными лимфоцитами.

Классификация антигенов.

1. По происхождению:

1) естественные (белки, углеводы, нуклеиновые кислоты, бактериальные экзо– и эндотоксины, антигены клеток тканей и крови);

2) искусственные (динитрофенилированные белки и углеводы);

3) синтетические (синтезированные полиаминокислоты, полипептиды).

2. По химической природе:

1) белки (гормоны, ферменты и др.);

2) углеводы (декстран);

3) нуклеиновые кислоты (ДНК, РНК);

4) конъюгированные антигены (динитрофенилированные белки);

5) полипептиды (полимеры a-аминокислот, кополимерыглутамина и аланина);

6) липиды (холестерин, лецитин, которые могут выступать в роли гаптена, но, соединившись с белками сыворотки крови, они приобретают антигенные свойства).

3. По генетическому отношению:

1) аутоантигены (происходят из тканей собственного организма);

2) изоантигены (происходят от генетически идентичного донора);

3) аллоантигены (происходят от неродственного донора того же вида);

4) ксеноантигены (происходят от донора другого вида).

4. По характеру иммунного ответа:

1) тимусзависимые антигены (иммунный ответ зависит от активного участия Т-лимфоцитов);

2) тимуснезависимые антигены (запускают иммунный ответ и синтез антител В-клетками без Т-лимфоцитов).

Выделяют также:

1) внешние антигены; попадают в организм извне. Это микроорганизмы, трансплантированные клетки и чужеродные частицы, которые могут попадать в организм алиментарным, ингаляционным или парентеральным путем;

2) внутренние антигены; возникают из поврежденных молекул организма, которые распознаются как чужие;

3) скрытые антигены – определенные антигены (например, нервная ткань, белки хрусталика и сперматозоиды); анатомически отделены от иммунной системы гистогематическими барьерами в процессе эмбриогенеза; толерантность к этим молекулам не возникает; их попадание в кровоток может приводить к иммунному ответу.

Иммунологическая реактивность против измененных или скрытых собственных антигенов возникает при некоторых аутоиммунных заболеваниях.

Свойства антигенов:

1) антигенность – способность вызывать образование антител;

2) иммуногенность – способность создавать иммунитет;

3) специфичность – антигенные особенности, благодаря наличию которых антигены отличаются друг от друга.

Гаптены – низкомолекулярные вещества, которые в обычных условиях не вызывают иммунной реакции, но при связывании с высокомолекулярными молекулами приобретают иммуногенность. К гаптенам относятся лекарственные препараты и большинство химических веществ. Они способны вызывать иммунный ответ после связывания с белками организма.

Антигены или гаптены, которые при повторном попадании в организм вызывают аллергическую реакцию, называются аллергенами.

2. Антигены микроорганизмов

Инфекционные антигены – это антигены бактерий, вирусов, грибов, простейших.

Существуют следующие разновидности бактериальных антигенов:

1) группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или семейства);

2) видоспецифические (встречаются у различных представителей одного вида);

3) типоспецифические (определяют серологические варианты – серовары, антигеновары – внутри одного вида).

В зависимости от локализации в бактериальной клетке различают:

1) О – АГ – полисахарид; входит в состав клеточной стенки бактерий. Определяет антигенную специфичность липополисахарида клеточной стенки; по нему различают сероварианты бактерий одного вида. О – АГ слабо иммуногенен. Он термостабилен (выдерживает кипячение в течение 1–2 ч), химически устойчив (выдерживает обработку формалином и этанолом);

2) липид А – гетеродимер; содержит глюкозамин и жирные кислоты. Он обладает сильной адьювантной, неспецифической иммуностимулирующей активностью и токсичностью;

3) Н – АГ; входит в состав бактериальных жгутиков, основа его – белок флагеллин. Термолабилен;

4) К – АГ – гетерогенная группа поверхностных, капсульных антигенов бактерий. Они находятся в капсуле и связаны с поверхностным слоем липополисахарида клеточной стенки;

5) токсины, нуклеопротеины, рибосомы и ферменты бактерий.

Антигены вирусов:

1) суперкапсидные антигены – поверхностные оболочечные;

2) белковые и гликопротеидные антигены;

3) капсидные – оболочечные;

4) нуклеопротеидные (сердцевинные) антигены.

Все вирусные антигены Т-зависимые.

Протективные антигены – это совокупность антигенных детерминант (эпитопов), которые вызывают наиболее сильный иммунный ответ, что предохраняет организм от повторного инфицирования данным возбудителем.

Пути проникновения инфекционных антигенов в организм:

1) через поврежденную и иногда неповрежденную кожу;

2) через слизистые оболочки носа, рта, ЖКТ, мочеполовых путей.

Гетероантигены – общие для представителей разных видов антигенные комплексы или общие антигенные детерминанты на различающихся по другим свойствам комплексах. За счет гетероантигенов могут возникать перекрестные иммунологические реакции.

У микробов различных видов и у человека встречаются общие, сходные по строению антигены. Эти явления называются антигенной мимикрией.

Суперантигены – это особая группа антигенов, которые в очень малых дозах вызывают поликлональную активацию и пролиферацию большого числа Т-лимфоцитов. Суперантигенами являются бактериальные энтеротоксины, стафилококковые, холерные токсины, некоторые вирусы (ротавирусы).


Занятие № 5

Каталог: files -> chairs
chairs -> Рабочая программа учебной дисциплины «медицинская реабилитация» цикла Медицинская реабилитация для специальности 310501 «Лечебное дело» по специализации 310501 «Лечебное дело»
chairs -> Пояснительная записка 5 Цели и задачи освоения дисциплины
chairs -> 1. Цели и задачи освоения учебной дисциплины Цели и задачи изучения дисциплины
chairs -> Рабочая программа «факультетская терапия. Профессиональные болезни»
chairs -> Рабочая программа учебной дисциплины «нервные болезни, нейрохирургия и медицинская генетика»
chairs -> Рабочая программа по госпитальной терапии профессионального цикла для специальности 060101 лечебное дело
chairs -> Правила написания психического статуса. Основные методы терапии Студент должен уметь: диагностировать эти патологические состояния у больных
chairs -> Учебно-методическое пособие для врачей и студентов Махачкала 2006 Составители: Эседов Э. М. заведующий кафедрой госпитальной терапии №3 с курсом клинической иммунологии и аллергологии, д м. н., профессор

Скачать 245.87 Kb.

Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3   4   5   6




База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2020
обратиться к администрации

    Главная страница