Национальный



страница10/10
Дата30.04.2016
Размер0.68 Mb.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10

ПРИЛОЖЕНИЕ В

Подтверждение результатов, полученных с помощью тест -полосок, другими методами: определение относительной плотности урометром, белка и глюкозы -химическими методами



В.1 Измерение относительной плотности мочи с помощью урометра.

Относительная плотность есть отношение массы образца мочи к массе равного объема дистиллированной воды при той же температуре. Отношение выражается числовыми значениями; нормальные значения: 1.003 – 1.035. Относительная плотность мочи зависит от концентрации растворенных в ней веществ (мочевины, солей натрия, белка, глюкозы и др.).

П р и м е ч а н и е 1. При измерении тест-полосками неионизированные вещества (глюкоза, рентгено-контрастные вещества) не влияют на результаты, тат как принцип измерения основан на зависимости относительной плотности от ионной концентрации.
Для определения относительной плотности используют урометры (комбинированные ареометры) с диапазоном шкалы от 0.001 до 1.050. При использовании урометра необходимо, чтобы он плавал в контейнере (цилиндре) и при этом не касался стенок, что требует достаточно широкого контейнера и относительно большого количества мочи. На определение относительной плотности урометром влияет температура, при которой производится измерение. Урометры градуированы для измерения при строго определенной температуре (15°, 20°, 22°С), обозначенной на приборе. Любое отклонение от этой температуры приводит к изменению объема и, следовательно, концентрации растворенных веществ и относительной плотности. При температуре, выше указанной, объем мочи увеличивается, концентрация и относительная плотность снижается, падение температуры приводит к обратному эффекту. При перемене температуры на три градуса относительная плотность изменяется на 0,001. Присутствие белка и глюкозы повышает относительную плотность: каждые 3 г/л белка дает повышение на 0.001, каждые 10 г/л глюкозы – на 0.004.
В.2 Измерение концентрации белка в моче химическими методами.

Измерение концентрации белка в моче химическими методами проводится в надосадочной жидкости (супернатанте) после центрифугирования мочи в стандартном режиме (1500 об/мин 10 мин).

В.2.1.Референтным методом измерения концентрации белка в моче является биуретовый метод, который выявляет полипептидные связи и не зависит от аминокислотного состава белка. Он с одинаковой эффективностью определяет альбумины, глобулины и другие белки. В связи с низкой чувствительностью метода определение белка в моче требует проведения осаждения и концентрирования белка, поэтому из-за большой трудоемкости метод в лаборатории практически не используется. В качестве химических методов рекомендуется исследование белка в моче с сульфосалициловой кислотой (ССК) и пирогаллоловым красным (ПГК).
В.2.2.Измерение концентрации белка в моче с сульфосалициловой кислотой.

Принцип метода: при взаимодействии белка мочи с ССК происходит денатурация белка и образование преципитатов, которое приводит к помутнению раствора. Степень помутнения условно пропорциональна содержанию белка в растворе.

Качественное исследование белка с ССК.

Реактивы: 20% раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход определения: в 2 пробирки наливают около 3-х мл супернатанта мочи. В опытную пробирку добавляют 6-8 капель реактива. На темном фоне сравнивают опытную пробирку с пробиркой, содержащей интактную мочу (бланком). Помутнение в опытной пробирке указывает на наличие белка, проба считается положительной.
П р и м е ч а н и е 1: При щелочной реакции порцию мочи для исследования подкисляют 2-3 каплями слабой уксусной кислоты.
Количественное исследование белка с ССК.

Реактивы: 3% раствор ССК, 0,9% раствор хлорида натрия (физраствор), 1% раствор стандарта белка.

Оборудование: фотометр, автоматические пипетки, пробирки.

Ход определения: к 1 мл мочи добавляют 3 мл 3% ССК, перемешивают и инкубируют 10 мин. Время инкубации отмечают по первой пробе. В качестве бланка используется проба мочи с физиологическим раствором. Бланк ставится отдельно для каждого пациента (бланк образца). По окончании срока инкубации измеряют абсорбцию опытной пробы против бланка при длине волны 590-650 нм. Определение концентрации проводят по калибровочному графику или по таблице, составленной в соответствии с графиком.

Калибровочный график. Для построения графика готовят разведения 1% стандартного раствора белка физиологическим раствором до конечной концентрации 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 и 1 г/л.

Каждое из разведений проводят через методику анализа аналогично пробе мочи. По результатам анализа чертят калибровочный график в координатах абсорбция (ось ординат) – концентрация (ось абсцисс). Линейность метода сохраняется до 1 г/л. При концентрациях белка выше предела линейности пробу мочи разводят физраствором в 5-10 раз и результат измерения умножают на разведение.

Референтные пределы 0,01-0,140 г/л (по Н.У. Тицу, 1997).

П р и м е ч а н и е 2: В качестве стандарта может быть использован альбумин и белок, состоящий из смеси альбумина и глобулина. Использование смешанного белка в качестве стандарта повышает надежность результатов.

П р и м е ч а н и е 3. В России производятся готовые наборы для определения концентрации белка с ССК.
Источники ошибок. Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче йод-контрастных веществ, большого количества пенициллина и сульфаниламидов, высокой концентрации мочевой кислоты. К недостаткам метода относится низкая устойчивость преципитата, сложная нелинейная зависимость абсорбции от концентрации белка, существенные различия в белковом составе калибратора и пробы мочи, неполная преципитация ряда белков анализируемой пробы, что приводит к получению заниженных результатов. Проба с ССК привлекательна исключительно по своей простоте и низкой себестоимости.
В.2.3 Количественное определение белка с пирогаллоловым красным (ПГК)

Принцип метода: при связывании белка с органическим красителем пирогаллоловым красным в кислой среде образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию белка в пробе. Комплекс устойчив к воздействию многих соединений, в том числе лекарственных препаратов, солей, оснований, кислот.

Реактивы. Для определения белка используют готовые наборы реактивов, которые выпускаются различными производителями. Стандартный раствор белка входит в состав набора. Ход определения указан в методике анализа. Измерение абсорбции проводится при длине волны 600 нм. Абсорбция остается стабильной при температуре измерения от 25 до 370С как минимум в течение 30 мин после окончания химической реакции. Линейность метода достигает 4-х г/л белка, а чувствительность составляет 0,03-0,04 г/л. Метод отличает хорошая воспроизводимость результатов, простота и удобство исполнения.

Оборудование: фотометр, автоматические пипетки.


П р и м е ч а н и е 4. Краситель ПГК не сорбируется на стенках кювет до концентрации белка 5 г/л, поэтому метод используется для измерения концентрации белка на автоматических биохимических анализаторах.
Референтные пределы 0, 024 -0,141 г/сутки (по Н.У. Тицу, 1997).

Специфичность. Метод наиболее чувствителен к альбумину, однако его чувствительность к глобулину и миеломному белку находится в пределах 70% по сравнению с альбумином. Использование в качестве стандарта смешанного белка снижает возможную погрешность в определении.

Источники ошибок. Возможные источники ошибок и влияющие факторы указаны в методике анализа. Вещества, присутствующие в моче, дают суммарную ошибку определения около 2%.

В..3 Определение глюкозы химическими методами

Для определения глюкозы используют глюкозооксидазный метод, основанный на окислении глюкозы глюкозооксидазой с образованием перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет ортотолидин или другое вещество, например, фенолфталеин, с образованием окраски, интенсивность которой измеряется фотометрически.

Имеются готовые наборы реактивов для выполнения химических методов, необходимо тщательно изучать инструкцию и точно ей следовать.

Концентрацию глюкозы в моче можно определять также гексокиназным методом с использованием готовых наборов реактивов и на анализаторе глюкозы, пригодном для определения концентрациинлюкозы в моче.




Библиография

1.Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации № 380 от 25 декабря 1997 г. «О состоянии и мерах по совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в учреждениях здравоохранения Российской Федерации».

2.«Инструкция по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». Москва, 1991.

3.«Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений». СанПиН 2.1.1.728-99., Москва, 1999 г.



1 Традиционно сложившееся в нашей стране наименование «Анализ мочи общий» за рубежом обозначается термином «Уринализ».




Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница