Роль цитомегаловирусной инфекции в патологии плода и новорожденного. Поиск новых противовирусных средств. 03. 00. 06. Вирусология


Действие ЦМВ на пролиферативную активность клеток ФЛЭЧ



страница3/3
Дата01.05.2016
Размер0.79 Mb.
ТипАвтореферат диссертации
1   2   3

Действие ЦМВ на пролиферативную активность клеток ФЛЭЧ.

Одним из показателей пролиферативной активности клеток является митотический индекс. Подсчет митотических фигур в контрольной и инфицированной ЦМВ культурах ФЛЭЧ показал, что в неинфицированной культуре митотический индекс достигал максимального уровня (2,3ο/οο) на 2-й день после пересева клеток, после чего снижался до 0,2 ο/οο к 4 дню. В то же время в культуре, зараженной ЦМВ с МИ 1-5 БОЕ/кл, величина митотического индекса постоянно возрастала, достигая на 4-й день после инфицирования 13,6 ο/οο.

В инфицированной культуре к концу первого дня инфекции наблюдались митотические фигуры, в которых расположение хромосом и их морфология не соответствовали ни одной из нормальных стадий митоза и характеризовались неправильным расположением хромосом, повышенной степенью их конденсации и фрагментацией части хромосом. Доля патологических митозов среди общего числа митотических клеток к 40 часам после заражения достигала 80%.

Было высказано предположение, что митотические клетки с аномальной морфологией не способны завершить деление. Подсчет митотических фигур, соответствующих стадиям анафазы и телофазы, показал, что если в контрольной культуре ФЛЭЧ их доля от общего числа митозов составляла в среднем 17%, то на 3-й и 4-й день суммарная доля анафазных и телофазных пластинок снижалось до 1%.

На тех же препаратах проводился подсчет клеток на единицу площади. Оказалось, что в то время как в контрольной культуре эта величина возрастала с 1-го по 4-й день культивирования, в инфицированной культуре число клеток на единицу площади существенно не увеличивалось. Следовательно, в ЦМВ-инфицированной культуре наблюдалась остановка деления клеток. Возможно, что блок клеточного цикла наблюдается на стадии митоза и связан с появлением патологии митотических клеток. Аномальные митотические фигуры при инфицировании активно делящихся клеток ФЛЭЧ появлялись в течение первых суток после заражения. Это наводило на мысль, что патология митоза развивается вне зависимости от синтеза вирусной ДНК, репликация которого начинается, в среднем, через 24 часа после проникновения вируса в клетку.

Для ответа на вопрос, связана ли патология митозов с репликацией вирусной ДНК и экспрессией вирусных белков была проведена серия опытов. Культуру заражали ЦМВ в присутствии ганцикловира, являющегося ингибитором репликации вирусной ДНК и вирусом, предварительно инактивированным УФ. Степень подавления синтеза ДНК ЦМВ оценивали по числу клеток, содержащих поздний вирусный белок gB с помощью МКА. На 3-и сутки после заражения интактным вирусом 35% клеток содержали белок gB. В культуре обработанной ганцикловиром число клеток, содержащих поздний антиген, не превышало 3%. Проникновение вирусных частиц внутрь клеток контролировали путем окраски МКА к белку рр65, который является мажорным белком тегумента. Было обнаружено, что 82% клеток содержали белок рр65 после обработки культуры инактивированным вирусом. Обработка вируса ультрафиолетом (УФ) приводила к снижению экспрессии сверхранних и ранних генов в 15 раз. При этом, появление патологических митозов в одинаковой степени наблюдалось во всех трех культурах.

Результаты подсчета митотического индекса и доли патологических митозов во всех культурах на 3 сутки показали, что в контрольной культуре было 9,3о/оо, в инфицированной культуре 19,8о/оо, из которых 9,7о/оо (48,9%) были патологическими. В культуре, зараженной вирусом, обработанным УФ, митотический индекс составил 15,7 о/оо, из них 7,2 о/оо (45,9%) митозов были с различной степенью патологии. В культуре, обработанной ганцикловиром, митотический индекс был несколько меньшим и составил 10,6 о/оо. Патология митоза наблюдалась в 6,0 о/оо, т. е. в 56,6% из всех митотических фигур в культуре. К 5-м суткам в культуре клеток после заражения вирусом обработанным УФ и в присутствии ганцикловира, также как и в культуре, инфицированной интактным вирусом, количество митозов с аномальной морфологией было близким и превышало 50%. Таким образом, было установлено, что подавление репликации ДНК ЦМВ, а также инактивация УФ транскрипции вирусных генов не препятствуют появлению патологических митозов.
Влияние ЦМВ на пролиферативную активность клеток, зараженных в стадиях G0, G1 и S клеточного цикла.

Для изучения влияния ЦМВ на митотический цикл была использована система с индуцированной пролиферацией: клетки вводили в состояние покоя G0, затем стимулировали к делению сывороточными ростовыми факторами. Заражали в различных стадиях клеточного цикла (G0, G1 и S).

Данные, полученные при заражении фибробластов, находившихся в момент инфицирования в состоянии покоя G0, представлены на рисунке 7, где точка 0 соответствует 48 часам после удаления сыворотки (G0 - период) и является моментом заражения клеток. Подсчет меченых клеток в контрольной культуре показал стандартный характер увеличения числа клеток, содержащих 3Н – тимидин. В зараженной культуре доля меченых клеток оставалась на низком уровне. Очевидно, что клетки инфицированной культуры не смогли выйти из состояния покоя и вступить в фазу синтеза ДНК после стимуляции.

Подсчет митотических клеток в инфицированной культуре, также показал снижение количества митозов с 3% в момент заражения, до 0% и оставался на этом уровне.


РИС.7. Включение 3Н - тимидина в ядра клеток ФЛЭЧ,

инфицированных в G0 – периоде.


0 6 12 18 -------------------------------------------------------------- 102

Принципиально сходные данные были получены при заражении ФЛЭЧ в стадии G1 клеточного цикла. Только 8% клеток инфицированных в G1 – периоде клеточного цикла включают 3Н-тимидиновую метку при стимуляции к делению.

Данные литературы о пролиферативной активности клеток, инфицированных в G1, противоречивы. Так, в ряде работ приведены данные, свидетельствующие об остановке ЦМВ – инфицированных клеток на границе G1/S [Dittmer and Mocarski, 1997; Kalejta et.al., 2003; Salvant et. al., 1999]. Weibusch and Hagemeier полагают, что к блоку клеточного цикла на стадии G1 может приводить экспрессия сверхраннего вирусного белка IE2 – 86 [Weibusch and Hagemeier, 1999].

Напротив, другая группа исследователей обнаружила, что IE2р86 не препятствует вхождению в S период пермиссивных к ЦМВ клеток [Murphy et. al., 2000]. В пользу этого говорят данные, полученные ранее Bresnahan с соавт., что IE2р86 активизирует промотор гена циклина Е и увеличивает уровень этого циклина, необходимого для вступления клетки в S – период [Bresnahan et. al., 1998]. Показано также, что ЦМВ приводит к деградации ингибитора циклин-зависимых киназ р21 СIP1 и, таким образом, индуцирует вхождение клеток в S – фазу [Bresnahan et. al., 1996; Sinclair et.al., 2000; Chen et. al., 2001]. Таким образом, наши данные подтверждают способность клеток, инфицированных в G1 – периоде преодолевать границу G1/S и дополняют их. Нами установлено, что лишь часть G1 – клеток способны вступить в стадию синтеза ДНК после заражения ЦМВ, но они не способны вступить в митоз. Динамика вступления клеток в фазу синтеза ДНК в культуре, инфицированной ЦМВ в S – периоде клеточного цикла, приведена на рисунке 8.



РИС. 8. Включение 3Н - тимидина в ядра клеток ФЛЭЧ,

инфицированных в S – периоде.




0 6 12 18 24 30 36 42 54 60 ----------96 ------------------102

0 6 12 18 24 30 36 42 54 60 ------96 ----- 102

Точка 24 соответствует моменту заражения клеток и 24 часам после добавления сыворотки (S - период). Подсчет меченых клеток показал, что в инфицированной культуре максимальное число клеток в стадии синтеза ДНК было достигнуто на 6 часов позднее, чем в контрольной популяции. Это позволяет предположить, что длительность S фазы в инфицированных клетках увеличивается.

Результаты по подсчету митотического индекса представлены на рисунке 9, где точка 0 соответствует моменту заражения клеток и 24 часам после добавления сыворотки.

РИС. 9. Митотический индекс в культуре клеток ФЛЭЧ, инфицированных в S – периоде клеточного цикла.


0 12 18 24 30 36 42 48 ---------------102


Количество митозов в контрольной и инфицированной культурах на протяжении 48 часов наблюдения практически не отличалось. Через 12 часов после заражения в культуре были зарегистрированы митотические фигуры с аномальным расположением хромосом, число которых постоянно возрастало. К 42 часам их число составило половину от общего количества митозов.

Таким образом, в культуре ФЛЭЧ, инфицированной в S-фазе, клетки, способны завершить период синтеза ДНК, хотя и с замедлением. Установлено, что, по крайней мере, в первые часы после заражения инфицированные клетки, находившиеся в S-периоде, способны войти в стадию G2, преодолеть границу G2/M и вступить в митоз подобно неинфицированной культуре.

Опубликованные в литературе данные, свидетельствуют о том, что под действием ЦМВ пролиферирующие клетки проходят S – период и останавливаются до вступления в митотическую фазу клеточного цикла на границе G2/M [McElroy et.al, 2000; Prichard et.al., 2008].

Данные, представленные в нашей работе показывают, что, по крайней мере, в первые часы после проникновения ЦМВ, вирус не препятствует вхождению в митоз клеток, находящихся в периоде синтеза ДНК. Полученные результаты находят подтверждение в работе Jault с соавт., которые установили, что в инфицированных фибробластах, находящихся в момент заражения в S – фазе клеточного цикла, регистрируется высокий уровень содержания циклина В и соответствующей циклин - зависимой киназы cdk-2 [Jault et. al., 1995]. Заключение авторов о блоке G2/М в ЦМВ - инфицированных клетках был сделан на основе данных проточной цитометрии ДНК, который не позволяет дифференцировать клетки, находящиеся в фазе G2 и в митозе, так как обе популяции содержат одинаковое (удвоенное) количество ДНК. Использованные нами методы (радиоавтографическое выявление S – фазных клеток и морфологический анализ митотических фигур) позволил доказать, что клетки зараженные в S – фазе, способны вступить в митоз.

Влияние ЦМВ на длительность фаз клеточного цикла.

Предположение о том, что в ЦМВ-инфицированных ФЛЭЧ прохождение S-фазы клеточного цикла происходит медленнее, чем в неинфицированной популяции, было проверено в дальнейших экспериментах с использованием метода меченых митозов (рис. 10). В обеих культурах митотические клетки, содержащие метку над хромосомами, впервые наблюдались через 4 ч после отмывки 3Н-тимидина, что соответствует продолжительности фазы G2 в диплоидных фибробластах человека. Это свидетельствует о том, что ЦМВ не влияет на прохождение стадии G2 клеточного цикла, по крайней мере, в первые часы после заражения - до 14 часов. Позже динамика меченых митозов существенно отличались в двух культурах. Снижение их доли до 50% было отмечено через 28 ч после начала опыта, в то время как в контроле этот показатель был достигнут уже к 18 часам.



РИС. 10. Изменение доли меченых митозов после импульсного внесения 3Н- тимидина в культуре диплоидных фибробластов человека, инфицированной ЦМВ.

4 6 8 14 18 21 28 39 50

Более медленное снижение числа меченых митозов в инфицированной культуре по сравнению с контрольной подтверждает высказанное предположение об увеличении длительности S-фазы в клетках, инфицированных ЦМВ. Расчеты по графику показали, что S период для контрольной культуры ФЛЭЧ составил 8 часов, а для культур, инфицированных ЦМВ, - 18 часов.

Приблизительно половина всех меченых митозов имели отклонения от стандартной морфологии. Другая половина патологических митозов оставалась немеченой. Как было установлено, около половины патологических митозов возникают при инфицировании клеток, находящихся в S – периоде клеточного цикла. Учитывая отсутствие митозов при инфицировании клеток в G1 – фазе, можно заключить, что остальные, немеченые патологические митозы возникают при инфицировании клеток в стадии, предшествующей митозу – G2 или после вступления клеток в митоз.

Таким образом, взаимодействие с клеточной мембраной или проникновение белков ЦМВ в клетку влечет за собой появление патологических митозов и изменение пролиферативной активности клеток. Показано, что влияние ЦМВ на клетку находится в зависимости от пролиферативного состояния клетки в момент заражения.


ВЫВОДЫ.

  1. Сравнительная оценка эффективности лабораторных методов выявления маркеров ЦМВИ у 204 недоношенных новорожденных детей показала, что частота определения ДНК ЦМВ методом ПЦР составила 15,9%, методом БКМ – 16,8%, двумя методами – 26,2%. Серологический анализ авидности противовирусных антител выявил прогностическую значимость низкоавидных антител. Показана необходимость комплексного использования перечисленных методов.

  2. Впервые разработан и использован для диагностики внутриутробной ЦМВИ метод ПЦР in situ при исследовании отпечатков органов и тканей умерших новорожденных. Метод позволяет визуализировать инфицированные клетки, оценить локализацию и сравнительное количество внутриклеточной вирусной ДНК.

  3. У новорожденных с признаками внутриутробного инфицирования (ВУИ) прямые маркеры ЦМВ обнаруживаются в 26% случаев, а у новорожденных без признаков ВУИ - в 5 раз реже (в 5% случаев). Через 1-3 месяца у 68% внутриутробно инфицированных происходит элиминация ЦМВ. У 19,2% к трем месяцам, еще у 11,5% к 6 месяцам неинфицированных детей маркеры ЦМВ появляются впервые. Эти данные свидетельствуют о том, что для достоверной диагностики ЦМВИ необходимо неоднократное обследование.

  4. Установлено, что применение виферона со второго триместра беременности приводит к снижению частоты осложнений беременности в 2-2,5 раза и к снижению патологии у новорожденных детей с 26,7% до 5,2%. Включение Виферона в комплексное лечение недоношенных новорожденных детей с клиническими признаками ВУИ оказывает иммунокорригирующий эффект и снижает смертность при жизнеугрожающих состояниях неонатального периода.

  5. Использование в предгравидарной подготовке женщин метаболической терапии за 2-4 месяца до наступления беременности позволяет существенно улучшить течение беременности и исходы родов. Использование метаболической терапии только в период беременности по этим показателям является недостаточной.

  6. Впервые установлено, что развитие ЦМВИ зависит in vitro от фазы клеточного цикла в момент заражения. ЦМВ блокирует вступление клеток ФЛЭЧ в S-период при заражении в G0- и G1-периодах клеточного цикла; в клетках, зараженных в S-периоде, удлиняется период синтеза ДНК, сохраняется способность вступить в митоз, который блокируется в метафазе.

  7. Индукция патологических митозов ЦМВ может происходить при действии на клетки вируса, инактивированного УФ, а также при подавлении синтеза вирусной ДНК ганцикловиром, что демонстрирует определяющую роль сигнальной трансдукции в регуляции вирусом митотических генов.

  8. Впервые установлено, что водорастворимые аминокислотные производные фуллерена С60 (Nа соль аминомасляной - С60-Na-АМК и Nа соль аминокапроновой кислот - С60-Na-АКК) являются высокоэффективными ингибиторами репродукции ЦМВ в системе in vitro. Химиотерапевтический индекс (ХТИ) при различных схемах воздействия для С60-Na-АКК составил 1150-2600; для С60-Na-АМК – 545-5450, что выше значений ХТИ для известных анти-ЦМВ препаратов.

  9. Установлена синергидность антивирусного действия аминокислотных производных фуллерена и виферона на модели ЦМВИ в культуре клеток. Это указывает на перспективность разработки комбинированного лекарственного средства, сочетающего антивирусные, иммуномодулирующие и антиоксидантные свойства.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

  1. Влияние цитомегаловируса на прохождение клеточного цикла и формирование патологических митозов в культуре диплоидных фибробластов человека. // Онтогенез - 2001, том 32, №1, стр.29-34. / соавт.: Барсукова А.С., Федорова Н.Е., Зацепина О.В., Кущ А.А.

  2. Сравнение эффективности лабораторных методов выявления цитомегаловируса в аутопсийном материале. // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунологии - 2002, Т.2, стр.63-69. / соавт.: Нисевич Л.Л., Федорова Н.Е., Ильина Е.Н., Талалаев А.Г., Адуева С.М., Хижнякова Т.М.., Малахова М.В., Говорун В.М., Кущ А.А.

  3. Острые респираторные вирусные заболевания и синдром внезапной смерти у детей раннего возраста. // Пульмонология - 2002, №5, стр.6-9. / соавт.: Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Яцык Г.В., Парсегова Т.С., Туманова Е.Л.

  4. Подавление цитомегаловирусной инфекции в клеточной системе аминокислотными производными фуллерена. // Вопросы вирусологии - 2002, Т.47, №1, стр.30-34. / соавт.: Федорова Н.Е., Адуева С.М., Романова В.С., Парнес З.Н., Галегов Г.А., Кущ А.А.

  5. Врожденные вирусные инфекции и маловесные дети. // Вопросы современной педиатрии - 2002, Том 1, №4, стр.9-13. / соавт.: Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Миронюк О.В., Парсегова Т.С., Туманова Е.Л., Кущ А.А., Климова Р.Р., Федорова Н.Е.

  6. Иммуноцитохимическая реорганизация ядрышка в условиях цитомегаловирусной инфекции. // ДАН - 2002, Том 387, №3, стр.589-592. / соавт.: Жарская О.О., Федорова Н.Е., Кущ А.А., Зацепина О.В.

  7. Активация транскрипции рибосомных генов при цитомегаловирусной инфекции фибробластов эмбриона человека in vitro. // Цитология – 2003, Том 45, №7, стр. 690-701. / соавт.: Жарская О.О., Барсукова А.С., Федорова Н.Е., Кущ А.А., Зацепина О.В.

  8. Nanobionics of pharmacologically active derivatives of fullerene C60. // Jornal of Nanoparticle Research, Netherlands - 2003, Vol. 5, P.561-566. / соавт.: Kotelnikova R.A., Bogdanov G.N., Frog E.C., Kushch A.A., Fedorova N.E., Miller G.G

  9. Блок клеточной пролиферации и патология митоза в клетках, инфицированных цитомегаловирусом: роль периода клеточного цикла в момент заражения. // ДАН - 2003, Том 392, №4, стр.552-555. / соавт.: Федорова Н.Е., Меджидова М.Г., Кущ А.А

  10. Значение врожденных вирусных инфекций как причины перинатальной и младенческой смертности. // Вопросы современной педиатрии - 2005, Том 4, №2, стр.19-25. / соавт.: Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Парсегова Т.С., Туманова Е.Л., Миронюк О.В., Кущ А.А.

  11. Выявление прямых маркеров цитомегаловируса и противовирусных антител у детей раннего возраста. // Вопросы вирусологии - 2005, Том 50, №1, стр. 14-19. / соавт.: Алямовская Г.А., Кешишян Е.С., Адуева С.М., Федорова Н.Е., Pustowoit B., Малахова М.В., Ильина Е.Н., Говорун В.М., Кущ А.А.

  12. Антивирусная активность липосомных препаратов антибиотика гелиомицина. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2005, Том 139, №3, стр. 330-333. / соавт.: Подольская С.В., Нарышкина Н.А., Сорокоумова Г.М., Каплун А.П., Федорова Н.Е., Кущ А.А., Швец В.И

  13. Лабораторная диагностика врожденных вирусных инфекций. // Детские инфекции - 2006, Том 5, №2, С. 12-18. / соавт.: Нисевич Л.Л., Бахмут Е.В., Аширова А.А., Кущ А.А., Коноплева Т.Н., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Парсегова Т.С., Туманова Е.Л.

  14. Влияние аминокислотных производных фуллерена С60 на развитие цитомегаловирусной инфекции. // Технологии живых систем - 2006, Том 3, №2, С. 42-46. / соавт.: Фрог Е.С., Котельникова Р.А., Богданов Г.Н., Штолько В.Н., Файнгольд И.И., Кущ А.А., Федорова Н.Е., Романова В.С.

  15. Перинатальные факторы риска внутриутробного инфицирования плода, патологии и смерти в перинатальном и младенческом возрасте. // Вопросы акушерства, гинекологии и перинатологии - 2007, Том 6, №4, С. 13-17. / соавт.: Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Парсегова Т.С., Туманова Е.Л., Кущ А.А.

  16. Преконцепционная подготовка женщин к беременности и ее влияние на плод и новорожденного. // Педиатрическая фармакология - 2008, Том 5, № 6, С. 45-51. / соавт.: Нисевич Л.Л., Меджидова Д.Б., Сулейманова И.Г., Гаджиева З.С., Шищенко В.М., Кущ А.А.

  17. Быстрый культуральный метод диагностики герпесвирусных инфекций. Методические рекомендации - Москва – 2008, С. 21 / соавт.: Кущ А.А., Федорова Н.Е., Климова Р.Р.

  18. Интерфероновый статус недоношенных новорожденных детей с клиническими признаками внутриутробной инфекции и его коррекция вифероном. // Российский аллергологический журнал - 2008, №6, С.74-81. / соавт.: Малиновская В.В., Гусева Т.С., Паршина О.В., Гаджиева З.С., Павлова М.В., Климова Р.Р., Володин Н.Н., Гетия Е.Г., Солдатова И.Г., Дегтярева М.В., Кущ А.А.

  19. Динамика маркеров герпесвирусных инфекций у недоношенных новорожденных детей в отделениях реанимации и интенсивной терапии. // Педиатрия - 2008, Том.87, №3, С.143-144. / соавт.: Гаджиева З.С., Павлова М.В., Гетия Е.Г., Н.Н.Володин, Ж.В. Евсегнеева, С.Н. Щербо, Е.Н. Выжлова, Р.Р. Климова, Н.Е. Федорова, М.В. Дегтярева, В.В. Малиновская, A.A. Кущ.

  20. Внутриутробная инфекция: мать-плацента-плод. // Детские инфекции - 2008, Том 7, №2, С.9-13. / Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Туманова Е.Л., Парсегова Т.С., Кущ А.А.

  21. Алгоритм вирусологического лабораторного обследования недоношенных новорожденных детей с врожденной цитомегаловирусной инфекцией в течение первого года жизни и влияние терапии Вифероном на исход внутриутробной инфекции. // Педиатрия – 2009, Т.87, № 2, С.55-62. / соавт.: Павлова М.В., Федорова Н.Е., Гаджиева З.С., Евсегнеева Ж.В., Щербо С.Н., Гетия Е.Г., Солдатова И.Г., Дегтярева М.В., Володин Н.Н., Малиновская В.В., Кущ А.А.

  22. Выявление прямых маркеров ВПГ и ЦМВ в аутопсийном материале плодов и умерших новорожденных с помощью быстрого культурального метода и полимеразной цепной реакции. // Вопросы практической педиатрии – 2009, №6, С. / соавт.: Нисевич Л.Л., Гаджиева З.С., Цибизов А.С., Климова Р.Р., Кущ А.А.

  23. Эффективность лечения рекомбинантным интерфероном α-2 (Вифероном®) недоношенных детей с тяжелыми внутриутробными инфекциями // Детские инфекции – 2009, №3, С.40-44. / соавт.: Кущ А.А., Дегтярева М.В., Малиновская В.В., Солдатова И.Г., Климова Р.Р., Серова Е.В., Гетия Е.Г., Цибизов А.С., Гаджиева З.С.

  24. Герпесвирусные инфекции и перинатальная патология. // Русский педиатрический журнал – 2009, №6 , С. / Адиева А.А.

  25. Nontoxic fullerene analogs, еffectively suppressing of HIV and CMV infectivity. // Russian Jornal of HIV/AIDS and related problems; Vol.4, №1 Sankt-Petersbourg - 2000, p.179-180. / соавт.: Kuschch A., Parnes Z, Romanova V., Pokidysheva L., Titova I., Makarova N., Adueva S.

  26. Involvement of congenital cytomegalovirus-infection in fetus and infant mortality. // Jornal of Clinical Virology. Vol.18, Nos.1-3, Glasgow, Scotland - 2000, p.195-196. / соавт.: Kushch A., Adueva S., Talalaev A., Fedorova N., Nisevich L.

  27. Изменение параметров митотического цикла в диплоидных фибробластах человека под действием цитомегаловируса. // Межд. конференция “Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротест-систем”- Махачкала - 2001, стр.102-103. / соавт.: Барсукова А., Федорова Н.

  28. Использование диплоидных фибробластов человека для изучения противовирусной активности аминокислотных производных фуллерена. // Межд. конференция “Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротест-систем”- Махачкала - 2001, стр. 101-102. / соавт.: Федорова Н., Адуева С., Романова В., Парнес З., Галегов Г.

  29. Нетоксичные производные фуллерена, эффективно подавляющие инфекционную активность ЦМВ in vitro. // 5 Междунар. конференция “Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы”, Т.4, №1 Санкт-Петербург - 2000, стр. 76-77. / соавт.: Кущ А.А., Парнес З.Н., Романова В.С., Макарова Н.Е., Адуева С.М.

  30. Выявление маркеров цитомегаловирусной инфекции у детей раннего возраста. // 3 Межд. конференция “Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротест-систем”- Махачкала - 2001, стр.105-106. / соавт.: Адуева С., Федорова Н., Алямовская Г., Сахарова Е., Кешишян Е.

  31. Острые респираторные вирусные заболевания и синдром внезапной смерти. // 11 Нац. конгресс по болезням органов дыхания - Москва - 2001, стр.180. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Парсегова Т., Туманова Е., Миронюк О., Кущ А., Климова Р.

  32. Острые и хронические внутриутробные вирусные инфекции в перинатальной и младенческой смерти. // Мат. 3 Рос. Научного форума “Актуальные проблемы акушерства, гинекологии и перинатологии” – Москва - 2001, стр.358-361. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Кущ А., Климова Р., Федорова Н., Корнюшин М.

  33. Различная чувствительность эмбриональных клеток человека к цитомегаловирусу. // Межд. конференция “Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротест-систем”- Махачкала -2001, стр.103-104. / соавт.: Адуева С., Хижнякова Т., Смирнова Т., Федорова Н.

  34. Сравнение эффективности методов лабораторной диагностики для выявления ЦМВ в аутопсийных материалах. // Межд. конференция “Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микротест-систем”- Махачкала - 2001, стр.106-107. / Нисевич Л., Федорова Н., Адуева С., Говорун В., Ильина Е., Малахова М.

  35. Использование методов лабораторной диагностики при оценке роли цитомегаловируса человека в смертности новорожденных и детей раннего возраста. // 8 Съезд всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.- Москва - 2002, стр.301. / соавт.: Нисевич Л., Федорова Н., Адуева С., Говорун В., Ильина Е., Малахова М., Кущ А.

  36. Nanobionics of farmacologicaly active derivates of fullerene C60. // 5 Международная конференция “Фуллерены и атомные кластеры”, С.-Петербург - 2002, 15-18 мая. / соавт.: Котельникова Р., Богданов Г., Фрог Е., Котельников А., Романова В., Андреев С., Кущ А., Федорова Н., Миллер Г.

  37. Врожденные аномалии легкого и бронхов у детей с внутриутробной инфекцией. // 12 Нац. Конгресс по болезням органов дыхания, Москва - 2002, стр.166. / соавт.: Нисевич Л., Кущ А., Миронюк О., Парсегова Т., Туманова Е.

  38. Значение острых респираторных вирусных заболеваний в танатогенезе новорожденных и детей первого года жизни. // 12 Нац. Конгресс по болезням органов дыхания, Москва - 2002, стр.201. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Кущ А., Миронюк О., Корнюшин М.

  39. Применение метода полимеразной цепной реакции для диагностики цитомегаловирусной инфекции. // Межд. конференция “Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины”, Москва - 2002, стр.251-252. / соавт.: Малахова М., Ильина Е., Федорова Н., Адуева С., Кущ А., Нисевич Л., Талалаев А.

  40. Лабораторная диагностика цитомегаловирусной инфекции у детей раннего возраста. // Научн. - практ. симпозиум “Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении”, Москва - 2002, стр.249-251. / соавт.: Адуева С., Меджидова М., Федорова Н., Кущ А., Ильина Е., Малахова М., Говорун В., Алямасольская Г., Кешишян Е., Воронцова Ю., Солдатова И., Дегтярева М.

  41. Врожденные пороки развития желудочно-кишечного тракта у детей с внутриутробной инфекцией. // 8 Конгресс Педиатров России “Детская гастроэнтерология: настоящее и будущее”, Москва - 2002, стр.199-200. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Миронюк О., Кущ А.

  42. К вопросу лабораторной диагностики урогенитальных инфекций. // 4 Межд. конференция ”Разработки и стандартизация микробиологических питательных сред и тест-систем ”, Махачкала - 2003, стр.81-83. / соавт.: Акаева Ф., Омарова С., Меджидов М., Алиева С.

  43. Нарушения клеточного цикла фибробластов человека, инфицированных цитомегаловирусом. // Цитология, С-Петербург - 2003,стр.939-940. / соавт.: Федорова Н., Меджидова М., Кущ А.

  44. Поражение бронхолегочной системы в перинатальной и младенческой смерти. // 13 Нац. конгресс по болезням органов дыхания, С-Петербург - 2003, стр.225. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Парсегова Т., Туманова Е., Кущ А.

  45. Поражение ЦНС при врожденных инфекциях по данным п/а и вирусологических исследований. // Научно - практ. конф. педиатров России и фармакотерапия в педиатрии, Москва - 2004, стр.28-29. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Миронюк О., Парсегова Т., Туманова Е., Кущ А.

  46. Применение биологически активных добавок в лечении урогенитальных инфекций. // Всероссийская научно - практ. конф. “Медицинская микробиология-хх1 век”, Саратов - 2004, стр.7-9. / соавт.: Акаева Ф., Омарова С., Меджидов Ш., Алиева С.

  47. Использование метода биорезонансного тестирования в лабораторной диагностике урогенитальных инфекций. // Всероссийская научно - практ. конф. “Медицинская микробиология-хх1 век”, Саратов - 2004, стр. 12-13. / соавт.: Акаева Ф., Омарова С.

  48. Выявление количественного состава ассоциаций хламидий при смешанной урогенитальной инфекции. // Росс. конгресс “Генитальные инфекции и патология шейки матки”, Москва - 2004, стр.77. / соавт.: Сулейманова И., Омарова С., Меджидов М., Акаева Ф., Алиева С.

  49. Клинико-диагностическая значимость ЦМВИ в развитии патологий плода и новорожденных. // Росс. конгресс “Генитальные инфекции и патология шейки матки”, Москва - 2004, стр.15-16. / соавт.: Сулейманова И.

  50. Поражения тимуса при внутриутробном инфицировании по результатам п/а и вирусологических исследований. // 3 Конгресс педиатров-инфекционистов “Актуальные вопросы инфекционной патологии у детей”, Москва - 2004, стр.163. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Парсегова Т., Туманова Е., Кущ А.

  51. Клинико-диагностические аспекты хламидийных уретритов у мужчин в городе Махачкале. // Всеросс. научн. конф ”Медицинские иммунобиологические препараты в 21 веке: разработка, производство и применение”, Уфа - 2005, стр.185-187. / соавт.: Акаева Ф., Омарова С., Садуллаева А., Гаджиева З., Алиева С., Меджидов М.

  52. Поражение ж/к тракта у детей с внутриутробной инфекцией по результатам аутопсий. // 10 Съезд педиатров России “Пути повышения эффективности медицинской помощи детям”, Москва - 2005, стр.379-380. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Парсегова Т., Туманова Е., Миронюк О., Кущ А.А.

  53. Удельный вес внутриутробных вирусных инфекций. // 8 Росс. Форум “Мать и дитя”, Москва - 2005, стр.581-582. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л.

  54. К вопросу о роли пневмоний в танатогенезе детей с внутриутробной инфекцией. // 4 Конгресс педиатров-инфекционистов России, Москва - 2005, стр.133. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л., Парсегова Т., Туманова Е., Кущ А.А.

  55. Врожденный сифилис у детей с внутриутробной инфекцией (по результатам п/а и вирусологических исследований). Нисевич Л., Меджидова А., Талалаев А., Каск Л., Парсегова Т., Туманова Е., Миронюк О., Кущ А.А.- 10 Конгресс педиатров России “Актуальные проблемы педиатрии”, Москва - 2006, стр.423.

  56. Факторы риска развития патологии и смерти в перинатальном и младенческом возрасте. // 11 Конгресс педиатров России ”Актуальные проблемы педиатрии”, 5-8февраль, Москва - 2007, стр.488-489. / соавт.: Нисевич Л, Талалаев А., Каск Л., Туманова Е., Парсегова Т., Сулейманова И., Меджидова Д.

  57. Значение врожденной вирусной инфекции в формировании аномалий развития по результатам аутопсий. // Астраханский медицинский журнал, Том 2, № 2. Астрахань – 2007, стр.133. / соавт.: Нисевич Л., Талалаев А., Каск Л. Н., Туманова Е., Парсегова Т., Кущ А.

  58. Гепатиты при врожденной вирусной инфекции. // Научно - практ. конф. и школа по инфекционной патологии, 20-24 ноябрь, Москва – 2007. / соавт.: Нисевич Л, Талалаев А., Каск Л., Туманова Е., Парсегова Т., Кущ А.

  59. Risk factors of intrauterine infection, preventive measures. // Proc.of international scientific-practical interdisciplinary workshop “New technology in medicine and experimental biology”, Thailand (Pattaya-Bangkok) - 2007, p.49-50. / соавт.: Nisevich L., Medjidova D., Suleimanova I., Kushch A.

  60. Цитомегаловирусная инфекция у недоношенных новорожденных детей: количественные методы лабораторного анализа. // VIII Международный конгресс “Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации”, 14-17 ноябрь, РУДН, Москва - 2007, стр.473-474. / соавт.: Павлова М.В., Федорова Н.Е., Гаджиева З.С., Гетия Е.Г., Дегтярева М.В., Щербо С.Н., Евсегнеева Ж.В., Гущин В.С., Выжлова Е.Н., Малиновская В.В., Кущ А.А.

  61. Выявление маркеров герпесвирусных инфекций у недоношенных новорожденных детей. // VI Конгресс детских инфекционистов России “Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики”, 13-14 декабрь, Москва - 2007, стр. 18-19. / соавт.: Гаджиева З.С., Павлова М.В., Климова Р.Р., Федорова Н.Е., Щербо С.Н., Евсегнеева Ж.В., Гущин В.С., Выжлова Е.Н., Малиновская В.В., Кущ А.А, Гетия Е.Г., Дегтярева М.В.

  62. Персистенция герпесвирусов у детей с осложненным течением раннего неонатального периода изменяет цитокиновый статус новорожденных детей. // Мат. III Ежегодного конгресса и VI Cъезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины «Современная перинаталогия: организация, технология и качество» (29-30 сентября) в журнале «Вопросы практической педиатрии», Москва - 2008, Том 3, №5, с. 17-18. / соавт.: Гетия Е.Г., Паршина О.В., Гусева Т.С., Кущ А.А., Климова Р.Р., Гаджиева З.С., Павлова М.В., Володин Н.Н., Малиновская В.В., Дегтярева М.В.

  63. Quantitative methods of analysis of cytomegalovirus infection in preterm infants during the 6 months. // Clinical Virology Annual Meeting, Saariselkä, Lapland, Finland, 12-15 March, Финляндия - Лапландия - 2008, Р.28. / соавт.: Pavlova M.V., Fedorova N.E., Gadzhieva Z.S., Kushch A.A. Getiya E.G., Degtyareva M.V., Malinovskaya V.V., Shcherbo S.V., Evsegneeva Zh.V.

  64. Врожденные пневмонии как одно из проявлений внутриутробной инфекции. // Сборник материалов XVI съезда педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии», 16-19 февраль, Москва - 2009, С.285. / соавт.: Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Парсегова Т.С., Кущ А.А.

  65. Проявления внутриутробного инфицирования у доношенных и недоношенных детей (по материалам аутопсии). // Сборник материалов XVI съезда педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии», 16-19 февраль, Москва - 2009, С.286. / соавт.: Нисевич Л.Л., Талалаев А.Г., Каск Л.Н., Парсегова Т.С., Кущ А.А.

Соискатель А.А. Адиева




Каталог: common -> img -> uploaded -> files -> vak -> announcements -> biolog -> 2009
2009 -> Системный подход к оценке состояния иммунного гомеостаза при остром инфаркте миокарда 14. 00. 36 аллергология и иммунология
2009 -> Ультраструктурная реорганизация коры надпочечников при экстремальных воздействиях (общей гипоксии, гипертермии и генетически детерминированных нарушениях метаболизма) 03. 00. 25 гистология, цитология, клеточная биология
2009 -> Интероцептивные эффекты психотропных препаратов 14. 00. 25-фармакология, клиническая фармакология
2009 -> Механизмы послеоперационных нарушений моторно-эвакуаторной функции желудка и тонкой кишки и их фармакологическая коррекция 14. 00. 16 патологическая физиология
biolog -> Закономерности влияния пестицидов на показатели метаболизма агрокультур и формирование патологий раннего онтогенеза человека 03. 00. 16 экология 03. 00. 04 биохимия
2009 -> Экспериментальное обоснование разработки средств профилактики при сочетанном воздействии на животных токсичных элементов, микотоксинов и пиретроидов 16. 00. 04 ветеринарная фармакология с токсикологией; 16
biolog -> Новые бактериоцины лактококков и их практическое использование
biolog -> Оглы паразитизм и хищничество представителей типа arthropoda в агробиоценозах основных ягодных культур


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница