Российская академия наук



страница60/848
Дата10.12.2019
Размер1.98 Mb.
1   ...   56   57   58   59   60   61   62   63   ...   848
Материал и методы. Клетки РПЭ, изолированные из аутопсийных глаз человека, культивировали в среде DMEM/F12, дополненной N2, bFGF и10 % FBS. Модель острой гипоксии была воспроизведена на самках крыс Wistar (весом 250-300 г) в барокамере. Через сутки после сеанса гипоксии в неокортекс и стриатум животных производили трансплантацию клеток РПЭ первичной или пассируемой (2-го или 4-ого пассажа) культуры, меченных ядерным красителем Hoechst 33342 (группы Г+РПЭ), или инъецировали физиологический раствор (группа Г+Ф). Иммуносупрессию животным не проводили. Для характеристики трансплантатов в головном мозге животных на 10 и 20 сутки после операции применяли иммунопероксидазный и иммунофлуоресцентный методы.

Результаты. В группе Г+Ф во всех случаях в области введения физиологического раствора наблюдался некроз ткани. Во всех группах Г+РПЭ ксенотрансплантаты естественно располагались в мозге реципиента, не изменяя ее морфологическую структуру и не вызывая контракции. Жизнеспособные клетки выявлялись антителами к белкам ядер человека (HuNuc). В случаях трансплантации пассируемых культур была выявлена миграция клеток РПЭ от области трансплантации по кровеносным сосудам реципиента. Иммуногистохимическая характеристика трансплантированных клеток РПЭ не отличалась от таковой клеток культуры перед трансплантацией. Так в трансплантатах было выявлено значительное количество β-тубулин-III-положительных клеток, а окраска на астроцитарный маркер GFAP и маркер нейрофиламентов выявлялась в единичных клетках. При расположении ксенотрансплантов в области стриатума среди клеток выявлялись пучки волокон нейрофиламетов. Это свидетельствует о том, что клетки трансплантатов не блокируют, а наоборот поддерживают и стимулируют регенерацию аксональных волокон реципиента. Нестин-позитивные трансплантированные клетки обнаруживались только при трансплантации первичной культуры клеток РПЭ. В этих же клетках сохранялся липофусцин и экспрессия специфического белка RPE65. Нестин-позитивные отростки этих клеток были ориентированы в различных направлениях и образовывали неупорядоченную сеть. Со стороны реципиента на всех сроках выведения животных из эксперимента на границе трансплантатов и мозга реципиента не были выявлены глиальные рубцы, а лишь некоторое усиление астроцитарной реактивности. Через 20 суток после операции отмечалась резорбция клеток в трансплантатах. Важно отметить, что фибронектин в клетках трансплантатов не экспрессировался, его экспрессия наблюдалась только на поверхности мозга, где повреждались оболочки при оперативном вмешательстве.

Выводы. Трансплантированные клетки РПЭ глаза взрослого человека могут переживать в головном мозге крыс, перенесших острую гипоксию, по крайней мере, в течение 20 суток. Дифференцировки трансплантированных клеток РПЭ в функционирующие нейроны в течение этого срока не отмечается, однако у этих животных наблюдается лучшая выживаемость нервных клеток.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект 11-04-00510) и Министерства образования и науки Российской Федерации (проект №16.512.11.2158).

Каталог: news
news -> Умеренные когнитивные нарушения у больных с сосудистым поражением головного мозга 14. 01. 11 нервные болезни
news -> 15-й международный медицинский форум «качество и безопасность оказания медицинской помощи» нижегородская ярмарка россия, Нижний Новгород
news -> Сборник материалов
news -> Разработка технологии вкусоароматических добавок с применением сенсорных технологий
news -> «казұму 85 жыл: жетістіктері мен келешегі» халықаралық ғылыми-тəжірибелік конференция аясындағы «клиникалық фармация: халықаралық ТƏжірибе мен қазақстанның денсаулық сақтаудағы даму ерекшеліктері»
news -> Программа международной научно-практической конференции 14-15 апреля 2016 г. Курск 2016
news -> Российская академия наук отделение физиологических наук


Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   56   57   58   59   60   61   62   63   ...   848


База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2017
обратиться к администрации

    Главная страница