В редакцию журнала


Работа № 2. Количественное определение активности альдолазы в сыворотке крови (метод Брунса в модификации Е.Н. Валуйской и В.И. Товарницкого)



страница263/319
Дата03.03.2020
Размер5.59 Mb.
ТипРуководство
1   ...   259   260   261   262   263   264   265   266   ...   319
    Навигация по данной странице:
  • Расчет.
Работа № 2. Количественное определение активности альдолазы в сыворотке крови (метод Брунса в модификации Е.Н. Валуйской и В.И. Товарницкого).

Принцип метода. Альдолаза расщепляет фруктозо-1,6-дифосфат, продукты расщепления которого образуют с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде соединения, окрашенное в малиной цвет. Фруктозо-1,6-дифосфат инкубируется в буферном растворе с исследуемой пробой и гидразинсульфатом для связывания образующихся фосфотриоз. Белки осаждаются трихлоруксусной кислотой и в фильтрате фотометрически определяется окрашенное производное фосфотриоз. Интенсивность окраски пропорциональна активности альдолазы.

Ход работы. В центрифужную пробирку поместить 0,5 мл исследуемой сыворотки крови, 0,5 мл 0,5 % раствора NaHCO3, 0,12 мл гидразинсульфата, 0,12 мл 0,002 М раствора монойодуксусной кислоты, 0,12 мл дистиллированной воды и 0,12 мл раствора фруктозо-1,6-дисфосфата. Смесь в пробирке перемешеть и поместить в термостат на 1 час при 38°С. После этого в пробирку добавить 1,5 мл 10 % раствора трихлоруксусной кислоты и содержимое пробирки отцентрифугировать 10 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость 0,5 мл перенести в чистую пробирку, добавить в нее 0,5 мл 3 % раствора NаОН и оставить на 10 мин при комнатной температуре. После этого добавить 0,5 мл 0,1 % раствора 2,4-динитрофенилгидразина и поставить в термостат при 38°С. По истечении 10 мин к содержимому пробирки добавить 3,5 мл 3% раствора NаОН и колориметрировать на ФЭКе в кювете толщиной 5 мм с зеленым светофильтром против воды.

Расчет. Активность альдолазы сыворотки крови выражают в условных единицах экстинкции, умноженных на 100.

В норме активность альдолазы в сыворотке крови составляет 3-13 единиц и выше.




Поделитесь с Вашими друзьями:
1   ...   259   260   261   262   263   264   265   266   ...   319




База данных защищена авторским правом ©zodorov.ru 2020
обратиться к администрации

    Главная страница